DNA 实验

微量样本核酸解决方案

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首先利用含有离液盐的溶液裂解酵母，以确保大分子彻底变性。之后加入乙醇，裂解物离心通过微量离心管时，DNA 会结合到离心柱硅胶模上。在洗涤去除污染物后，将 DNA 用 Tris-EDTA 溶液中洗脱。回收的 DNA 可用于酶切、PCR、Southern 杂交等）。

分子克隆是将重组DNA插入到载体中的一套方法，载体作为DNA分子的携带者，将在宿主体内复制重组DNA片段。

RNA 甲基化修饰水平测定

单细胞多组学

复合性状转基因动物制备技术，由于畜禽生物育种和人类重大疾病的动物模型研究需要我们利用现代基因工程技术同时对一个动物基因组的两个或两个以上基因进行修饰，复合性状基因修饰技术已成为基因工程技术发展的主要方向之一。动物的特性往往不是由一个基因决定的，特定经济性状可能与多个基因相关；或者在实际生产中，需要基因工程动物具有两种或两种以上的基因特性。目前的动物基因工程方法每次转基因只整合一个目的基因，进而制备

可编程核酸酶已成为一种新的有前途的基因扰动技术，能够精确识别和切割目标 DNA,特别是来自微生物的 CRISPR （簇状规则间隔短回文重复序列）免疫系统的 RNA 引导的核酸内切酶 Cas9 已被证明对 DNA 的精确修饰具有强大的功能。与大型混合单向导 RNA（sgRNA）文库一起，Cas9 可以介导许多表型的高通量LOF和功能获得 (GOF) 研究，并阐明复杂的生物学问题。作为 CRISPR-

杆状病毒是双链DNA病毒，主要感染昆虫，也感染体外昆虫细胞系，对人畜无毒害。苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）是目前宿主最广、应用最多的杆状病毒。它与草地贪夜蛾Sf21细胞系建立了广为应用的Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，该系统表达的外源基因，表达量多，能进行产物加工、修饰和折叠，形成有生物活性的产物。是当今基因工程领域中的四大表达系统之一，已表达上千种外源基因。

原位切口平移技术又称为原位缺口翻译（in situ nick translation）。它最早用于研究DNA体外复制，其后又扩展至研究染色体、培养细胞与组织切片的DNA转录效力。它一方面具有实感性，便于观察记录；另一方面也可作半定量（计数银颗粒）或定量（收集细胞作液闪测定）测定，其优点是显而易见的。本技术是在分子水平上反映遗传物质的改变，因此其敏感性要比诸如染色体畸变、断裂、姊妹染色单体交换频率改

定量PCR可以用于：（1）以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量；（2）用外标法（荧光杂交探针保证特异性）通过监测PCR过程（监测扩增效率）达到精确定量起始模板数的目的，同时以内对照有效排除假阴性结果（扩增效率为零）。

印迹杂交是指将待测核酸片段结合到一定的固相支持物上，然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术（Southern blot）是将DNA转移到固相支持物上，然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术可检测特定大小DNA分子的含量，常用于克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。

琼脂糖凝胶电泳可应用于：（1）DNA切胶回收；（2）DNA分离；（3）佐证DNA是否重组，质粒等是否切开以及其他分子生物学研究。

在研究人类基因组和动物细胞基因组染色体的基因定位、文库构建、大尺度和精细物理图谱分析、指纹图谱分析中，必须分离、制备染色体DNA。因此，DNA提取技术是最基本的分子生物学实验方法。目前，用于提取DNA的方法有多种，常见的方法有SDS-蛋白酶K-苯酚抽提法、CTAB法、煮沸法、碱裂解法、Triton-溶菌酶裂解法、盐析法等。

基因突变是可遗传的 DNA 序列的改变，可能由 DNA 复制错误 DNA 损伤或修复时发生的错误导致。突变分为点突变、插入或缺失，其中点突变分为错义突变、无义突变、同义突变等。

CNV 指对比不同个体的基因组时所发现的存在拷贝数目差异的 DNA 序列。该序列片段长度大小从千到兆个碱基不等。目前，CNV 分型方主要有 3 种：核型分析、荧光原位杂交和以芯片为基础的比较基因组杂交。

STR 指 DNA 中两个以上核苷酸直接彼此相邻的重复模式，通过对基因组特异位置特异序列重复数的鉴定可能实现个体的遗传剖析。在法医学案件侦查中，STR 分析已经成为了一项十分普遍的遗传鉴定手段。目前，用于 STR 分型分析实验的方法主要有 3 种：基于平板胶和毛细管电泳分析 STR 分型、基于基因芯片分析 STR 分型和基于质谱分析 STR 分型。

SNP 即指同一物种成员或同一个体配对染色体由基因组中单个核苷酸——A、T、C 或 G 的变化导致的 DNA 序列差异。SNP 分析是遗传分析的核心部分。目前，用于 SNP 分型分析实验的方法主要有 3 种：限制性片段长度多态性分析检测、 基因芯片 SNP 分型分析和 5』-核酸酶等位基因鉴别。

鉴定和分析疾病相关基因可帮助人们深入了解疾病的病因和发病机制，以利于疾病的诊断和治疗。目前疾病相关基因定位、克隆及鉴定过程，更多地选用「疾病表型——基因——基因产物」的思路进行研究。一般来讲，遗传性疾病表型往往是由于基因组内致病基因异常导致的；出现异常的基因在基因组上具有确定的位点，该位点与个体广泛存在的 DNA 分子标记之间存在广泛联系，通过 DNA 标记与该位点之间的连锁分析和关联分析就能不断

体外基因突变技术分随机突变（random mutagenesis）和定点突变（site-directed mutagenesis）两类。定点突变常用技术包括：利用M13 噬菌体进行体外基因定点突变、利用PCR 进行体外基因定点突变。