免疫学实验

流式细胞术（flow cytometry，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。流式细胞术不仅可测量细胞的大小、内部颗粒的性状，还可检测细胞表面和胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等，在细胞生物学、血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、

免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理。通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（Immunocytochemistry）。

免疫荧光通过抗体与示踪物质结合，利用抗原-抗体结合反应，进而对抗原所在的细胞或组织进行定性或定量。

免疫沉淀实验是利用抗原-抗体特异性反应富集靶蛋白的一种方法。目前，用于免疫沉淀实验的方法主要有 5 种：抗体结合蛋白免疫共沉淀法、沉降技术法、串联亲和纯化技术法、染色质免疫共沉淀法和 RNA 结合蛋白免疫共沉淀法。

免疫共沉淀是一种用于从复杂混合物中富集或纯化特定蛋白质的技术，然后结合质谱可以鉴定特定蛋白的相互作用蛋白。

细胞因子 (cytokine) 是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称。在免疫应答过程中，细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子及受体检测是判断机体免疫功能的一个重要指标，具有重要的实验研究价值和临床实用价值，可以作为许多疾病辅助诊断依据或用于病程观察、疗效判断等。目前，用于细胞因子的检测方法主要以下几种：酶联免疫吸附实验 (ELISA) 细胞因子的

一种利用抗原或抗体进行相应特异性免疫反应的检测实验，是目前即时检验（POCT）的主要方法之一。

外泌体提取纯化

免疫印迹（immunoblotting）是一种将印迹技术与抗原-抗体反应的特异性相结合的检测技术，用于定性定量检测生物大分子的存在、分子的大小及其与其他大分子的相互作用。免疫印迹包括蛋白印迹、DNA 印迹和 RNA 印迹，其原理近似但各有特性。其基本技术流程均包括：生物大分子的电泳分离，分离样本的印迹（转膜），大分子的特异性免疫检测三个步骤。

基因芯片技术是来自分子生物学、微电子学、化学合成和计算机学等多学科交叉融合而成的技术。其出现和应用为基因表达谱研究、新基因的发现、基因突变检测、多态性分析、基因组作图和功能基因组研究等提供了强有力的工具，被认为是生命科学的重大突破之一。目前，用于基因芯片技术的方法主要有1种：其主要的包括基因芯片的制作和基因芯片的使用两个方面。

荧光蛋白的实用性在于它可以实时的监测蛋白表达和定位。而很多情况下对这些蛋白的应用需要利用荧光激活的细胞分选仪（FACS）对细胞进行准确和定量地分析和分选。我们特别介绍利用 FACS 来分选有 EGFP（增强绿色荧光蛋白）表达和基因诱捕的内源性启动子的细胞。利用荧光报告基因进行基因诱捕为我们提供了一种敏感的方法来校准诱捕的基因表达水平和回收那些表达追踪基因的细胞。本方法将阐明以下几点：① 荧光载体转

荧光报告蛋白的多参数流式细胞术是使我们能够非介入式地区分不同的细胞群，或者在单个细胞水平来分析基因功能和蛋白-蛋白之间的相互作用的实验。目前，主要的方法有 ① 稳定表达 ECFP、EGFP、EYFP 和（或）DsRed 蛋白的细胞系的建立；② 四色荧光蛋白的同时检测；③ 其他同时检测 2、3 或 4 种荧光蛋白的方法共 3 种方法。

外周造血池动员的 CD34NEG 造血前体细胞表型和功能分析是在无血清培养条件下，研究原始CD34NEG CD38NEG LINNEG 细胞和CD34+ CD38NEG LINNEG 细胞增殖状态过程中 CD34 抗原表达调变的实验。

端粒长度是衡量细胞分化和衰老进程的重要指标。流式细胞仪分析测定端粒长度已成为繁琐的 Southern blotting 检测方法的重要补充。流式细胞仪可以对很少的细胞群体相当准确地测定端粒的长度，还可以同时分析不同荧光免疫表型细胞亚群。目前，用于荧光原位杂交和流式细胞术测定端粒长度实验的方法主要包括：定量测定端粒长度的试验和基于细胞表型的端粒长度定量的测定方法。

随着高速分选有活性的、传染性细胞和治疗性细胞样品需求的增加，保护流式细胞仪操作员的安全也相应显得尤为重要。通过 BSL-3 实验室确保分选活的、传染性细胞之前的样品密闭保护。这个程序包括气溶胶控制、物理屏障、环境控制和个人防护。气溶胶处理系统在分选室里面产生负压使气溶胶直接通过真空装置进入到高效粒子空气过滤器。物理屏障包括仪器制造厂的标准塑料防护罩和屏蔽面板。出于最大限度地考虑环境控制的原因，BS

流式细胞仪同步分析 DNA 和 RNA 分析提供了细胞的 DNA 含量和细胞转录状态的信息。这一分析方法可以通过利用与 DNA 结合的异染荧光物质以及由静电作用与单链 RNA 结合的异染荧光物质来检测 DNA 以及 RNA。分析的首要条件就是细胞的活性，所以应该使用新鲜处理的细胞。利用流式细胞仪同时分析 DNA/RNA 技术原先是被用于包括多发性骨髓瘤在内的血液恶性肿瘤的分类及生物学鉴定。

流式细胞术 DNA 含量检测提供了一种快捷和可信的 DNA 倍体和肿瘤标本中细胞增殖分数分析方法。保存的和新鲜的标本都适用于该技术，在肿瘤的早期阶段，包括乳腺癌、结肠癌、肺癌和膀胱癌，其所获得信息可以与传统的预后因素联合对这些肿瘤做出生物评价。

细胞周期的动态信息可以通过标记 5＇-BrdUrd 获得，BrdUrd 可以掺入到 DNA 的胸腺嘧啶位点上。检测 DNA 中的 BrdUrd 就可以计数 S 期的细胞，如果在不同时间间隔采集标本，就可以获得细胞周期动力学的信息。

哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱系统（MAPPIT）是基于对 I 型细胞因子受体信号传导机制的认识而设计的双杂交系统。「诱饵」多肽和「猎物」多肽与突变细胞因子受体嵌合体连在一起，后者的信号传导是受损的。在相应的配体刺激后，如果「诱饵」与「猎物」能相互作用结合，JAK-STAT 信号级联放大系统启动，诱导受控于 STAT3 响应 rPAP1（rat pancreatitis associat-ed p

通过多种方法检测体内外分子间相互作用，使得对细胞各种生命过程的研究更加方便。一种用来研究与活细胞动态生命过程有关的、分子间相互作用的非常有价值的工具，就是利用荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer，FRET）现象，加上使用选择性荧光素耦联的靶分子。许多报告都利用了荧光团耦合抗体用于FRET分析。然而，这些方法都局限于细胞外分子且必须有合适的抗