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荧光原位杂交和流式细胞术测定端粒长度

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

端粒长度是衡量细胞分化和衰老进程的重要指标。流式细胞仪分析测定端粒长度已成为繁琐的 Southern blotting 检测方法的重要补充。流式细胞仪可以对很少的细胞群体相当准确地测定端粒的长度,还可以同时分析不同荧光免疫表型细胞亚群。目前,用于荧光原位杂交和流式细胞术测定端粒长度实验的方法主要包括:定量测定端粒长度的试验和基于细胞表型的端粒长度定量的测定方法。

原理

荧光原位杂交和流式细胞术测定端粒长度实验的基本原理是基于荧光原位端粒长度,因其整合了荧光免疫分型技术,能针对确定特定细胞群体鉴定其端粒长度,这相对于传统方法将具有明显的优点。因此,流式细胞术-原位杂交法(flow-FISH),一种应用荧光素靶向端粒-互补寡聚核苷酸探针原位检测端粒长度的流式细胞术方法,已经广泛被应用。

来源:丁香实验团队

操作方法

定量测定端粒长度的试验

在细胞标记之前,将细胞分散为单个细胞悬液。每个细胞的样品应分为两份,一份与标记 PNA 探针共育,另外一份不标记的作为空白对照。如果细胞数量允许的话,推荐作 2 个复管或 3 个复管。每次试验进行对照细胞检测验证杂交过程非常重要。理想的方法是对照样本无论检测长的端粒还是短的端粒都必须与样品同时进行检测。Hultdin 等在每个样品检测时使用 1301 细胞系作为内参。这些永生化的细胞系有很长的端粒

基于细胞表型的端粒长度定量的测定方法

用流式细胞仪测量端粒长度或任何细胞特征的最大优点在于它可以针对同一细胞群同时分析多参数。因此在测定端粒长度时,可以同时标记细胞表面标志,这是一种很有价值的方法,可以鉴别不同免疫细胞群体中的端粒长度。如果采用上述的方法对于复杂的血细胞或组织样品来说,在检测不同细胞群体的端粒长度前必须依据自身特征进行分离(如图 22-4 所示那样先分离初始和记忆 T 细胞亚群)。采用荧光素偶联的抗体进行免疫荧光表型分

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