免疫组化

一. 试剂配制1.0.01MPBS(pH7.34)9.0gNaCl+50ml0.2MPB加双蒸水至1000ml；1000ml0.2 MPB(pH7.4)＝5.93gNaH2PO4·2H2O＋58.02gNa2HPO4·12H2Oin1000ml双蒸水或＝190mlA+810mlB（A.0.2M NaH2PO4·2H2O：15.6gin500mlddH2O；B.0.2MNa2HPO4·12H2O：7

免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜 （包括荧光显微镜、电子显微镜）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质 （如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等）。

免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某

免疫组化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理。通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（

1. 洗载玻片： 将载玻片置于重铬酸钾和浓 H2SO4 混合液中， 目的是为了是载玻片上的硅胶等除去， 同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整， 便于组织吸 附， 然后置于清水中清洗， 除去残余的重铬酸钾和浓 H2SO4（大约冲一个小时左右）， 再将载玻片浸泡于酒精之中， 然后放到架子上， 置于 37 °C 温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于 Lys 带正电，而大多数的组织带负电荷，从

1、石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。2、取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗2×3’。（注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体

（若非石蜡切片直接进行第 4 步梯度水化即可）（若为冰冻切片，则进行以下步骤后直接进行第 5 步内源性过氧化物酶阻断：一、样本处理1、加固定剂（按下述固定剂选择固定条件）：10% 中性缓冲福尔马林：在室温下固定 10 min。冷冻丙酮：-20 ℃ 冷冻 10 min，风干。甲醇：-20 ℃ 冷冻 10 min。3% 甲醛：室温下固定 15 min。3% 甲醛/甲醇：在 3% 甲醛溶液中室温固定 1

相较于石蜡切片，冰冻切片具有制片快速、抗原活性好的优势，在免疫组化染色中无需进行脱蜡和抗原修复。主要流程包括：样本前处理、封闭、一抗孵育、二抗孵育、酶底物显色或荧光检测、封片观察等步骤。图：冰冻切片免疫组化染色流程图以直接取材为例，展示冰冻切片组化染色实验流程：1、实验前处理 冰冻切片取材可分为动物灌流固定和直接取材：动物灌流固定：a.通常采用预冷的 1xPBS 灌流冲洗至血液全部放出，随后灌注4

细胞爬片技术自诞生以来，就在不断进化以满足科研人员对组织细微结构及蛋白表达进行精确检测的需求。从手工制作到自动化处理，从简单染色到多重标记，极大提升了实验的精准度和效率。相较于石蜡切片，细胞爬片能更好地保存组织的三维结构和更丰富的表面抗原信息，而相比于冰冻切片，它在多染色的复杂实验中显示出更高的稳定性。常作为免疫组化和免疫荧光检测的检测样本，助力观察特定细胞类型的分布、识别病变细胞以及监测药物对细