免疫组化
上海歌凡生物科技有限公司
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免疫组化实验步骤
试剂： PV-9000 通用二步法试剂盒 （北京中杉金桥）
ZLI-9018 DAB显色试剂盒 （北京中杉金桥）
抗原修复液柠檬酸钠
0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）PH值6.0。
抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。
三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。
四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS洗3遍。
五．封闭 1-2%山羊血清封闭30min
六．除去封闭液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体， 4℃过夜，一抗稀释比例：1:200
七．洗一抗。PBS洗3遍，每次5min。
八．加聚合物辅助剂1 。37℃孵育20min。
九．孵二抗2h(室温)。
十．洗二抗 PBS洗3遍，每次5min
十一.DAB显色30sec.
十二.自来水充分水洗.染苏木素、水洗、酒精分化、脱水、透明、封片。
试剂： PV-9000 通用二步法试剂盒 （北京中杉金桥）
ZLI-9018 DAB显色试剂盒 （北京中杉金桥）
- 脱蜡至水
- 二甲苯Ⅰ(8min)
- 二甲苯Ⅱ(8min)
- 无水乙醇和二甲苯1:1(5min)
- 无水乙醇(3min)
- 95%乙醇(3min)
- 85%乙醇(3min)
- 75%乙醇(3min)
- PBS洗3遍
抗原修复液柠檬酸钠
0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）PH值6.0。
抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。
三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。
四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS洗3遍。
五．封闭 1-2%山羊血清封闭30min
六．除去封闭液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体， 4℃过夜，一抗稀释比例：1:200
七．洗一抗。PBS洗3遍，每次5min。
八．加聚合物辅助剂1 。37℃孵育20min。
九．孵二抗2h(室温)。
十．洗二抗 PBS洗3遍，每次5min
十一.DAB显色30sec.
十二.自来水充分水洗.染苏木素、水洗、酒精分化、脱水、透明、封片。
