🔥 免疫组化实验全流程

免疫组化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理。

通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（Immunocytochemistry）。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。

仪器设备

（1）18 cm 不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；

（2）水浴锅。

试剂

（1）PBS 缓冲液（pH 7.2～7.4）：NaCl 137 mmol/L, KCl 2.7 mmol/L, Na₂HPO₄ 4.3 mmol/L, KH₂PO₄ 1.4 mmol/L。

（2）0.01 mol/L 柠檬酸盐缓冲液（CB, pH 6.0, 1000 ml）：柠檬酸三钠 3 g, 柠檬酸 0.4 g。

（1）0.5 mol/L EDTA 缓冲液（pH 8.0）：700 ml 水中溶解 186.1 g EDTA·2H₂O，用 10 mmol/L NaOH 调至 pH 8.0，加水至 1000 ml。

（2）1 mol/L 的 TBS 缓冲液（pH 8.0）：在 800 ml 水中溶解 121 g Tris 碱，用 1 N 的 HCl 调至 pH 8.0，加水至 1000 ml。

（3）酶消化液：

a、0.1% 胰蛋白酶液：用 0.1% CaCl₂（pH 7.8）配制。

b、0.4% 胃蛋白酶液：用 0.1 N 的 HCl 配制。

（4）3% 甲醇-H₂O₂ 溶液：用 30% H₂O₂ 和 80% 甲醇溶液配制。

（5）封裱剂：

a、甘油和 0.5 mmol/L 碳酸盐缓冲液（pH 9.0～9.5）等量混合；

b、油和 TBS（或 PBS）配制。

（6）TBS/PBS pH 9.0～9.5, 适用于荧光显微镜标本；pH 7.0～7.4 适合于光学显微镜标本。