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荧光报告蛋白的多参数流式细胞术

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

荧光报告蛋白的多参数流式细胞术是使我们能够非介入式地区分不同的细胞群,或者在单个细胞水平来分析基因功能和蛋白-蛋白之间的相互作用的实验。目前,主要的方法有 ① 稳定表达 ECFP、EGFP、EYFP 和(或)DsRed 蛋白的细胞系的建立;② 四色荧光蛋白的同时检测;③ 其他同时检测 2、3 或 4 种荧光蛋白的方法共 3 种方法。

原理

荧光报告蛋白的多参数流式细胞术的基本原理是利用来自生物发光的水母的 GFP 蛋白一种方便和敏感的检测转基因在哺乳动物细胞,包括造血干细胞中表达的重要标志物,其中,ECFP 是发射光向蓝光偏移的 EGFP 的衍生物,而 EYFP 则是发射光向红光偏移的 EGFP 的衍生物。红色荧光蛋白 drFP583(通常指的是珊瑚红色荧光蛋白,DsRed)被从一组非发光的珊瑚的 GFP 样的蛋白中的分离。与大多数的向红光偏移的 GFP 突变体相比,DsRed 可以向光谱的红光一侧偏移 50 nm,而具有最大发射光谱。大约 30 种的 GFP 蛋白已经被克隆和进行光谱学分析。然而,通过对非荧光的蓝紫色谱蛋白的突变可以产生新的红色荧光蛋白,蛋白折叠和光谱性状均被改进了的 DsRed 可以和 ECFP、EGFP 及 EY-FP 同时在多色的流式细胞仪中使用。

来源:丁香实验团队

操作方法

稳定表达ECFP、EGFP、EYFP和(或)DsRed蛋白的细胞系的建立

稳定表达 ECFP、EGFP、EYFP 和(或)DsRed 蛋白的细胞系的建立是用流式细胞仪同时检测四色荧光蛋白要求这些细胞要表达每一种蛋白,同时,能够表达多个荧光蛋白的细胞可以用来确认分群的正确性。

同时检测四色荧光蛋白法

同时检测四色荧光蛋白法是一种通过通过一台具有可调激光的流式细胞仪同时检测四色荧光蛋白的方法。

同时检测2,3或4个荧光蛋白的其他方法

同时检测 2,3 或 4 个荧光蛋白的其他方法是由于 ECFP,EGFP,EYFP 和 DsRed 具有较宽的激发和发射波谱,可以利用不同的手段来检测不同组合的荧光蛋白的方法。

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