同时检测2,3或4个荧光蛋白的其他方法

同时检测 2,3 或 4 个荧光蛋白的其他方法是由于 ECFP，EGFP，EYFP 和 DsRed 具有较宽的激发和发射波谱，可以利用不同的手段来检测不同组合的荧光蛋白的方法。

器材：

① 流式细胞仪，配置如下：

（1）488 nm 的激发波长作为一级激光器，407 nm 作为二级或三级激光器。

（2）检测光学装置：488/10 nm 带通滤光片，470/20 nm 带通滤光片，510/20 nm 带通滤光片，550/30 nm 带通滤光片，610/20 nm 带通滤光片，525 nm 短通二色棱镜，及 610 nm 短通二色棱镜（伯瑞特波罗，佛蒙特州）。

（3）激光内或激光间的补偿。

② 校准微球。

试剂:

① Sp2/0-Ag14 细胞（美国典型培养物保藏中心，马纳萨斯，弗吉尼西，目录号. CRL-1581）；

② 含有逆转录病毒载体的 GP＋E-86 上清，病毒载体中含有 ECFP，EGFP，EYFP，或 DsRed 荧光蛋白基因以及新霉素抗性基因（neo 基因）；

③ 0.45 μm 无菌滤膜；

④ 海美溴铵（聚凝胺）：配置 1 mg/ml 的储存液，过滤，4 ℃ 保存；

⑤ 遗传霉素 Geneticin（G418）：配置 40 mg/ml 的储存液，过滤，分装，- 20 ℃ 保存；

⑥ Sp2/0-Ag14 的培养基：Dulbecco's modified Eagle medium（DMEM）加高浓度葡萄糖，及 5％（体积比）胎牛血清；

⑦ GP＋E-86 的培养基：Dulbecco's modified Eagle medium（DMEM）加高浓度葡萄糖，及 10％（v/v）胎牛血清；

⑧ 分析缓冲液：PBS + 2％（v/v）胎牛血清。

同时检测2,3或4个荧光蛋白的其他方法基本过程可分为以下几步：

A.

B. 可行的激发波长（nm）：

(1)ECFP：407,413 或 458

(2)EGFP：458 或 488

(3)EYFP：458,488 或 514

(4)DsRed：488,514,531 或 568

C. 可使用的检测光学装置（nm）

(1)ECFP：470/20 或 485/22 带通滤光片。

(2)EGFP：510/20 或 530/30 带通滤光片。

(3)EYFP：530/30,546/20，或 550/30 带通滤光片。

(4)DsRed：585/42 或 610/20 带通滤光片。

(5) 二色分光棱镜可以用来分离一些波长：500-长通滤光片、525、560、或 610 的短通滤光片。

(6) 用于散射的滤光片：带通滤光片来捕捉（主要的）激发波长。

(7) 必要的激光限制波段或陷波滤光片。

D. 可用的检测设置：