定量检测绿色荧光蛋白（rAcGFP1）

1. 应用说明

AcGFP1是从水母（Aequorea coerulescens）中分离出来的荧光蛋白，是EGFP的优良的代替品。AcGFP1的特性与EGFP相似，AcGFP1的激发波峰为475nm，发射波峰为505nm。此外，AcGFP1与EGFP在核酸水平上有94%的同源性。

AcGFP1的特点是具有进行了人类密码子优化的开放阅读框。这不仅提高了AcGFP1 mRNA的转化效率同时也提高了它在高等哺乳动物细胞中的表达水平。另外，AcGFP1蛋白很稳定，可以对它在长时间范围内进行荧光检测。这种载色体成熟的很迅速，转染后8-12小时就可以进行检测。因此AcGFP1可被用来实时检测蛋白质的转运。

ModulusTM 多功能检测仪可以检测到低至5pg/ul的重组AcGFP1。

2. 实验准备

ModulusTM 多功能检测仪 （P/N 9200-001 or 9200-002）；Blue荧光模块（P/N 9200-040）；微量适配器（P/N 9200-928）；纯化的rAcGFP1蛋白；（Clontech，NO.632502）；200ul加样器与20ul加样器；TE Buffer（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0）；1.5ml离心管

3. 仪器准备

3.1 关闭Modulus的电源，为Modulus插入BLUE荧光检测模块。

3.2 打开Modulus的电源，仪器预热1min

3.3 按照说明插入微量适配器

4. 制备标准曲线

4.1 按照下表系列稀释rAcGFP1：

表 1. rAcGFP1 稀释：使用适当体积的rAcGFP1和TE Buffer进行系列稀释。

4.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意：避免在微量比色杯中出现气泡，负责会引起检测误差。

4.3 将微量比色杯插入到微量适配器中，点“Measure Fluorescence Raw.”检测

4.4 记录检测结果，对其他样品重复4.2-4.3的步骤

4.5 利用荧光值（FSU）与样品浓度做出标准曲线

4.6 使用标准曲线来检测未知样品的浓度

5. 校准

5.1 使用Modulus检测未知样品前，你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Modulus仪器

5.2 使用表1中的5个稀释液来校准Modulus。选择“ng/uL”作为测量单位，使用0 ng/uL作为空白标准；为了尽可能准确，使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。

5.3 保存校准，可供以后调用 （可选）。

5.4 使用“Measure Fluorescence.”开始检测未知样品。注意：在校准后就无需再做标准曲线。

5.5 样品浓度将直接在屏幕上显示。

(责任编辑：大汉昆仑王)