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以荧光激活细胞分选技术为基础的哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱系统(MAPPIT)是基于对 I 型细胞因子受体信号传导机制的认识而设计的双杂交系统。「诱饵」多肽和「猎物」多肽与突变细胞因子受体嵌合体连在一起,后者的信号传导是受损的。在相应的配体刺激后,如果「诱饵」与「猎物」能相互作用结合,JAK-STAT 信号级联放大系统启动,诱导受控于 STAT3 响应 rPAP1(rat pancreatitis associat-ed protein 1)启动子下的报告基因或标记基因大量转录。除了为哺乳动物蛋白-蛋白相互作用系统提供相关的生理环境外,这种方法也提供了分隔的作用区和效应区,能被用于分析和筛选目的。

原理

哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱系统(MAPPIT)的基本原理是 「诱饵」多肽和「猎物」多肽与突变细胞因子受体嵌合体连在一起,后者的信号传导是受损的。在相应的配体刺激后,如果「诱饵」与「猎物」能相互作用结合,JAK-STAT 信号级联放大系统启动,诱导受控于 STAT3 响应 rPAP1(rat pancreatitis associat-ed protein 1)启动子下的报告基因或标记基因大量转录,这种方法提供了分隔的作用区和效应区,结合流式细胞术可用于分析和筛选细胞。

来源:丁香实验团队

操作方法

以荧光激活细胞分选技术为基础的哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱系统的建立

哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱系统(MAPPIT)是基于对 I 型细胞因子受体信号传导机制的认识而设计的双杂交系统。“诱饵”多肽和 “猎物” 多肽与突变细胞因子受体嵌合体连在一起,后者的信号传导是受损的。在相应的配体刺激后,如果“诱饵”与“猎物”能相互作用结合,JAK-STAT 信号级联放大系统启动,诱导受控于 STAT3 响应 rPAP1(rat pancreatitis associat-ed

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