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简介
通过多种方法检测体内外分子间相互作用,使得对细胞各种生命过程的研究更加方便。一种用来研究与活细胞动态生命过程有关的、分子间相互作用的非常有价值的工具,就是利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)现象,加上使用选择性荧光素耦联的靶分子。许多报告都利用了荧光团耦合抗体用于FRET分析。然而,这些方法都局限于细胞外分子且必须有合适的抗体。目前,适合 FRET 的绿色荧光蛋白(GFP)变体的发展扩展了此种方法的使用范围,不仅能用于细胞外也能用于细胞内分子过程的研究。FRET 与流式细胞分析技术的结合,使得对分子间相互作用的研究可以高通量高效率地进行。
原理
荧光共振能量转移的流式细胞分析的原理是通过构建 GFP 变异体的融合蛋白,且将它们转入适当的细胞体系中,此细胞体系可以通过流式细胞术监测活细胞中不同生物机制的分子间相互作用。FRET 分析与流式细胞术结合使用将更有利于研究者在短时间内筛选大量的细胞。
来源:丁香实验团队
操作方法
通过多种方法检测体内外分子间相互作用,使得对细胞各种生命过程的研究更加方便。一种用来研究与活细胞动态生命过程有关的、分子间相互作用的非常有价值的工具,就是利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)现象,加上使用选择性荧光素耦联的靶分子。许多报告都利用了荧光团耦合抗体用于 FRET 分析。然而,这些方法都局限于细胞外分子且必须有合适