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流式细胞术

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术。流式细胞术不仅可测量细胞的大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,在细胞生物学、血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。

原理

流式细胞仪主要是测量单个细胞经适当染色后所发出的散射光和荧光,经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点,当每个细胞经过焦点时,发出一束散射光/荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置),光检测器把散射光定量转化成电信号,经数字转换器进行数字化后进行电子存储,以后数据可以调出显示和进行分析。

应用

流式细胞术可应用于:(1)分离和鉴定细胞群及亚群;(2)分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量;(3)分析细胞内抗原物质。

来源:丁香实验

操作方法

流式细胞仪

一、 细胞和试剂的准备 1. 细胞样品:来源淋巴细胞或外周血的白细胞。 2. 荧光标记单克隆抗体:常用的有FITC(fluorescein -isothiocyanate)和PE(phycoerythrin)标记的单克隆抗体。 3. 封闭抗体:抗Fc受体抗体 4. FACS缓冲液: 1xPBS 950 ml FCS 40 ml 10%叠氮钠溶液 10 ml 5. 仪器缓冲液(FACS-

流式细胞学检测时细胞有很多碎片

1. 固定时间太长会让细胞碎片增多;2. 重悬细胞不建议用旋涡震荡,可使用吸头吹吸,注意不要吹起气泡;3. 消化过度,可适当降低浓度或减少用量来降低胰蛋白酶消化对细胞的损伤;4. 传代后次日细胞换液,先用缓冲液漂洗两次以洗去未贴壁的细胞及细胞碎片,再加入新的培养液继续培养;5. 确保细胞是新鲜收集的,否则容易出现大量死细胞和碎片。

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