免疫印迹（immunoblotting）

免疫学实验

别名：

immunoblotting

最新修订时间：2023-05-16

简介

免疫印迹（immunoblotting）是一种将印迹技术与抗原-抗体反应的特异性相结合的检测技术，用于定性定量检测生物大分子的存在、分子的大小及其与其他大分子的相互作用。免疫印迹包括蛋白印迹、DNA 印迹和 RNA 印迹，其原理近似但各有特性。其基本技术流程均包括：生物大分子的电泳分离，分离样本的印迹（转膜），大分子的特异性免疫检测三个步骤。

原理

蛋白印迹（Western blotting/protein blotting）用于分离和检测生物样本中的某一特定蛋白，其基本原理是通过凝胶电泳分离混合蛋白质样本，将其在特殊虹吸或电场装置印迹（blot）至固相介质上，即将凝胶与固相介质（滤膜）贴合，可使凝胶中已分离的各蛋白条带转移至固相介质的相应位置；而后根据抗原-抗体特异性结合的原理，将针对特定蛋白的特异性酶联抗体作用于滤膜，使目的蛋白与抗体特异性结合，最后利用偶联的酶降解底物生成有色沉淀物或产生化学发光产物，从而在滤膜上显示蛋白的存在及量。

DNA 印迹（Southern blotting）技术主要用于检测基因组中某一特定 DNA 片段，其基本原理是首先由限制性内切酶作用于染色体基因组，获得若干大小不一 DNA 片段，通过琼脂糖凝胶电泳各 DNA 片段根据大小不同得以分离。在印迹装置中，DNA 在碱性缓冲液中变性为单链 DNA（ssDNA），在琼脂糖凝胶上方覆盖一层硝酸纤维素滤膜或尼龙膜，DNA 由于毛细效应随缓冲液向上到达滤膜，则将 DNA 条带转移到滤膜上。随后以放射标记的目的基因特异性 DNA 探针与滤膜孵育，最后通过放射自显影法使目的 DNA 条带显示在胶片上。随着免疫学技术的进步，也可采用酶标抗体法检测探针中标记的地高辛，利用酶作用于底物显色，进而反映目的 DNA。Southern blotting 在阐明免疫球蛋白和 T 细胞抗原受体（TCR）的多样性中发挥了至关重要的作用。

与 Southern blotting 相对应，RNA 印迹（Northern blotting）用于检测样本中特异性 mRNA 分子。mRNA 首先被变性成为非折叠线性形式，而后根据片段大小由凝胶电泳予以分离，而后转移至硝酸纤维素膜上。滤膜随之与放射标记的 DNA/RNA 探针杂交，通过放射自显影，显示特异性 mRNA 分子的存在。Northern blotting 技术通常用于检测特定 mRNA 的细胞表达水平。

来源：丁香实验团队

操作方法

蛋白印迹

Western blotting 主要用于检测蛋白质，其技术流程分为蛋白质电泳分离、蛋白印迹（转膜）和免疫检测三个步骤。

DNA印迹

DNA 印迹（Southern blotting）技术用于检测基因组中的某一特定 DNA 片段，在阐明免疫基本原理中抗体（免疫球蛋白）以及 T 细胞抗原受体（TCR）的多样性中发挥了至关重要的作用。

RNA印迹

RNA 印迹（Northern blotting）技术用于检测特异性 mRNA 的存在。RNA 经甲醛或乙二醛-二甲基亚砜变性后，在琼脂糖凝胶中电泳，可分离和解旋成单链，然后将 RNA 从凝胶上转移到具有吸附单链 RNA 特性的硝酸纤维素膜上。常见的 RNA 变性凝胶电泳有两种：① 乙二醛和二甲基亚砜使 RNA 变性后，进行凝胶电泳，RNA 可直接由凝胶转移到硝酸纤维素膜上。② 通过甲醛变性凝胶电

🔥 菌落免疫印迹法

菌落免疫印迹法是通过抗体与目标抗原（通常是细菌的表面抗原）结合的免疫化学反应，形成可见的免疫印迹，来检测和鉴定目的抗原。