简介
RNA 印迹（Northern blotting）技术用于检测特异性 mRNA 的存在。RNA 经甲醛或乙二醛-二甲基亚砜变性后，在琼脂糖凝胶中电泳，可分离和解旋成单链，然后将 RNA 从凝胶上转移到具有吸附单链 RNA 特性的硝酸纤维素膜上。
常见的 RNA 变性凝胶电泳有两种：
① 乙二醛和二甲基亚砜使 RNA 变性后，进行凝胶电泳，RNA 可直接由凝胶转移到硝酸纤维素膜上。
② 通过甲醛变性凝胶电泳。
原理
RNA 印迹的基本原理是 mRNA 首先被变性成为非折叠线性形式，而后根据片段大小由凝胶电泳予以分离，而后转移至硝酸纤维素膜上。滤膜随之与放射标记的 DNA/RNA 探针杂交，通过放射自显影，显示特异性 mRNA 分子的存在
用途
RNA 印迹技术用于检测特异性 mRNA 的存在。
材料与仪器
试剂：
琼脂糖、DEPC-H2O、10 x MOPS、甲醛、EB
仪器：
电泳仪、尼龙膜
步骤
RNA 印迹的基本过程可以分为以下几步：
1．甲醛变性凝胶电泳分离 RNA
1）制胶（50 ml）：琼脂糖 0.75 g，DEPC-H2O 35 ml，10 x MOPS 5.5 ml，甲醛 10 ml，EB 2.5 μl。
2）将制备好的胶置入电泳槽，加电泳缓冲液 1xMOPS 450 ml，100V 电压预电泳 5 分钟。
3）取总 RNA，加 RNA 甲醛电泳完全加样液（按 RNA：Loading dye ＝ 1:4）；65 ℃ 变性 10 分钟，立即置冰上 5 分钟；将样本点于胶孔中，60 V 电压下电泳 2～3 小时。
4）电泳结束后处理凝胶，DEPC 水冲洗凝胶 3 次，20xSSC 浸泡凝胶 40 分钟。
2．RNA 印迹
1）毛细管转移印迹装置，同 Southern blotting，转膜 4～18 小时。
2）转膜结束后，取出滤膜，边角剪一小角做标记。滤膜于 2 x SSC 摇洗 5 分钟，用滤纸吸干。
3）置 80 ℃ 真空烤箱烘烤 2 小时固定 RNA，进行后续杂交检测。
3．免疫检测
1）将转移后滤膜用紫外交联照射（正面朝上）3 分钟或于 80 ℃（120 ℃）烤箱烘烤 2 小时。
2）预杂交和杂交方法同 Southern blotting，预杂交和杂交温度的选择：DNA 探针应用 50 ℃，RNA 探针应用 68 ℃，寡核苷酸探针应用温度同 Southern blotting 方法中所述。
3）杂交后膜的处理方法同 Southern blotting。
注意事项
（1）甲醛琼脂糖凝胶质地脆弱，小心操作凝胶止凝胶碎裂。一旦建立转膜系统后，要防止滤膜和凝胶错位。防止吸水纸倒塌和完全湿透，要及时更换吸水纸。
（2）用于 Northern blotting 的所有试剂和溶液必须保证不含 RNA 酶，否则会导致 RNA 降解。
来源：丁香实验
