🔥 分子克隆技术

利用一次 PCR 方法进行定点突变分子克隆，较盒式突变及其它传统方法更快速简便。

SLIC 克隆是一种基于 DNA 重组技术的克隆方法，通过利用外源 DNA 和目的 DNA 的线性化切片段相互衔接，使用序列无关的连接酶将它们连接起来，从而实现基因片段的拼接。

是一种基于转座子元件的 DNA 插入方法，适用于插入小片段的 DNA 序列（约为 4~5 kb）。

（1）PCR：按照 PCR 试剂说明书（天根 KT211），加入目的 DNA 或者 cDNA、引物、PCR 试剂、ddH2O 等，按照程序进行 PCR 扩增。参考体系如下：程序如下：扩增完成后，将 PCR 产物按 120 V 30 min 的条件进行琼脂糖凝胶电泳，一般情况下琼脂糖凝胶的浓度为 0.8%~1.0%。在核酸凝胶成像仪中观察目的条带，将目的凝胶切割下来，按照 DNA 琼脂糖凝胶回收试剂

一步法克隆是一种简单、快速和高效的克隆技术，现有许多一步法克隆试剂盒可以买到，它能够将扩增的 DNA 产物定向插入任何线性化载体的任何位点，线性化的载体和插入片段的 PCR 产物无需纯化即可直接用于重组，非常简便。

(1) PCR：按照 PCR 试剂说明书（天根 KT211），加入目的 DNA 或者 cDNA、引物、PCR 试剂、ddH2O 等，按照程序进行 PCR 扩增。注意所使用的酶可以在 3’端添加 A。参考体系如下：程序如下：扩增完成后，将 PCR 产物按 120 V 30 min 的条件进行琼脂糖凝胶电泳，一般情况下琼脂糖凝胶的浓度为 0.8%~1.0%。在核酸凝胶成像仪中观察目的条带，将目的凝胶切

Gateway 克隆属于高效大规模克隆系统，是利用载体上一系列特殊的酶，可以高效、方便、快速地将不同 DNA 序列拼接在一起，将目的基因克隆到受体上用于重组表达载体、RNA 干扰载体、报告基因载体等等。

Gateway 克隆属于高效大规模克隆系统，是利用载体上一系列特殊的酶，可以高效、方便、快速地将不同 DNA 序列拼接在一起，将目的基因克隆到受体上用于重组表达载体、RNA 干扰载体、报告基因载体等等。

Gateway 克隆属于高效大规模克隆系统，是利用载体上一系列特殊的酶，可以高效、方便、快速地将不同 DNA 序列拼接在一起，将目的基因克隆到受体上用于重组表达载体、RNA 干扰载体、报告基因载体等等。

1、首先合成引物对目的基因进行 PCR 扩增，将 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳，并回收目的 DNA 片段。2、将目的 DNA 片段和载体质粒进行酶切，回收后进行连接，建议 4 ℃ 连接过夜。3、转化感受态细胞。取出感受态细胞置于冰上融化，加入连接产物轻轻混匀后放置冰上 30 min，42 ℃ 热激 45 s 后再放置于冰上静置 3 min。在超净工作台中加入无抗 LB 肉汤培养基 500 μL，