想请问一下，重组质粒做PCR目的条带很清晰，但是做双酶切结果显示只有目的条带，但没有载体片段是为什么

pcr产物双酶切后连接只长出原载体，请问哪里出了问题

基因过表达，跨膜区碱基错配，是否影响膜蛋白

目的片段和表达载体双酶切产物胶回收