突变基因检测实验
最新修订时间：
简介
原理
来源：丁香通实验团队
操作方法
英文名： single-strand conformation polymorphism, SSCP单链构象多态性分析是因为短于 400 碱基长的单链 DNA 在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，单一碱基的改变往往足可以影响 DNA 的构象而显示出不同的迁移率。原理基于单链构象多态性检测突变基因的基本原理是对目标区域的片段进行 PCR 扩增，得到相同长度 DNA 片段 原本由于双链 DNA 两个等位基因的物理
基于错配化学裂解法检测突变基因英文名：chemical cleavage of mismatch , CCM错配化学裂解法与其他方法相比，能分析 2kb 范围内的较长片段。原理错配化学裂解法的基本原理是检测突变时， PCR 扩增得到的异源双链与两种错配特异性试剂孵育，其中羟胺能修饰未配对的胞嘧啶，高锰酸钾修饰未配对的胸腺嘧啶。样品接着与哌啶孵育，能在 DNA 骨架中修饰过的错配碱基处发生裂解，裂解的产物通过电泳分析，显示突变特
基于变性高效液相层析法检测突变基因英文名：denaturing high perlormance liquid chromatograph DHPLC变性高效液相层析方法可实现基因突变分析的高通量，自动化，且无需标记，也不用专门对样品进行纯化，特异且快速。原理变性高效液相层析的基本原理是检测突变时， PCR 扩增得到的相同长度的 DNA 片段，包括含有特异位点的靶 DNA 片段和作为对照的正常 DNA 片段，二者只有一个位点差异，
基于温度梯度凝胶电泳法检测突变基因英文名：temperature gradient gel electrophoresis, TGGE温度梯度凝胶电泳检测突变基于部分变性的 DNA 在凝胶等多孔介质中迁移减慢的原理，通过熔解温度进行 DNA 分离。原理温度梯度凝胶电泳检测的基本原理是在靶 DNA 和对照正合变性－退火后，同源双链在温度梯度胶内只出现单一条带；若靶 DNA 个突变碱基，则在梯度胶中会出现靶 DNA 的同源双链，正常
基于动态等位基因特异性杂交法检测突变基因英文名：dynamic allele- specific hybridization, DASH动态等位基因特异性杂交同样基于碱基发生错配时 DNA 熔解温度不同进行突变位点鉴定，检测熔解温度值的定量改变，因而能针对多种突变类型设计检测，实验条件温和。原理动态等位基因特异性杂交的基本原理是在碱基发生错配时 DNA 熔解温度不同，通过荧光探针标记进行突变位点检测。
基于分子信标检测法检测突变基因分子信标是一种末端互补、中间设计为特异序列的单链寡核苷酸探针。原理该设计使得探针以茎环结构存在，探针一端有有荧光基团，一端连有猝灭基团。 在茎环结构下，两基团紧密相连，因而无任何荧光发出 当探针遇到它的靶基因组 DNA, 会退火 、杂交 探针序列很长，因而变性时原来的茎环部分会形成更稳定的线性杂合体，这种构象改变使得荧光基团与悴灭基团远离而发出荧光。如果设计两个不同荧光的探针，一个检测野生型，一个
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