简介
英文名:chemical cleavage of mismatch , CCM
错配化学裂解法与其他方法相比,能分析 2kb 范围内的较长片段。
原理
错配化学裂解法的基本原理是检测突变时, PCR 扩增得到的异源双链与两种错配特异性试剂孵育,其中羟胺能修饰未配对的胞嘧啶,高锰酸钾修饰未配对的胸腺嘧啶。样品接着与哌啶孵育,能在 DNA 骨架中修饰过的错配碱基处发生裂解,裂解的产物通过电泳分析,显示突变特性及其位置。
材料与仪器
样本的基因组 DNA
步骤
1) 样本基因组 DNA 的提取
2) 设计引物,PCR 扩增目标 DNA 序列,PCR 产物分别与错配特异性试剂孵育
3) 凝胶电泳分析突变特征及位置
来源:丁香实验