从琼脂糖凝胶中回收的 DNA 片段,如 PCR 产物或酶切 DNA 片段,对进一步酶切具有一定的抗性。这种抗性产生的原因是多方面的,通常将其归为抑制剂的存在。经带正电荷的离子交换树脂纯化的双链 DNA 可有效去除样品中的抑制剂。在低离子强度的缓冲液中,带负电的 DNA 结合到带正电的基质上。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。
虽然理论上 M13 重组噬菌体所能携带的外源 DNA 片段没有限制,但实际上是有限的:长片段的外源 DNA 比短片段的更易发生缺失和重排。因此如果可能,最好克隆至 M13 噬菌体的 DNA 片段不要大于 1000 碱基。而且,当用“正向”或“反向”通用测序引物进行 DNA 测序时,大片段的中心区域可能位于所能测到的区域外。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。