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高容量载体中基因组 DNA 片段末端的分离(小载体 PCR)

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

许多真核生物的基因所包含的 DNA,远非单个重组子所能容纳得了的。对于大多数染色体来说,更是如此。因此,必须构建一套重叠的 DNA 克隆,这些克隆的 DNA 按次序排列能形成叠连序列(叠连群),可以涵盖一个很大的基因或目的区域。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源:丁香实验

操作方法

高容量载体中基因组DNA片段末端的分离(小载体PCR)

一、材料 1. 缓冲液和溶液 10X 扩增缓冲液 dNTP 溶液(1 mmol/L,包括所有 4 种 dNTP ( pH 8.0;PCR 级) 乙醇 酚:氯仿(1:1, V/V) 醋酸钠(3 mol/L, pH 5.2) 10X T4 DNA 连接缓冲液 2. 酶及其缓冲液 T4 噬菌体 DNA 连接酶 限制性内切核酸酶 PstⅠ或 NsiⅠ 耐热性 DNA 聚合酶 3.

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