M13 噬菌体双链（复制型）DNA 的制备

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

感染 M13 噬菌体的细菌含病毒双链 RF DNA，培养基中粗提病毒颗粒中含单链子代 DNA，双链 RF DNA 可以采用类似于质粒纯化的方法从感染细胞的小量培养物中分离。从 1~2 ml 的感染细胞培养物中可以分离几微克的 RF DNA，这个量足以进行亚克隆和作限制酶酶切图谱。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备

一、材料 1. 缓冲液和溶液碱裂解液Ⅰ 碱裂解液Ⅱ 碱性裂解液Ⅲ 乙醇酚：氯仿（1:1，V/V）含 20 μg/ml Rnase A 的 TE ( pH 8.0)。 2. 酶和缓冲液限制性内切核酸酶 3. 凝胶琼脂糖凝胶（0.8%) 悬于 0.5 X TBE，含 0.5 μg/ml 溴化乙锭 4. 载体和菌株感染了 M13 噬菌体的大肠杆菌培养物二、方法