M13 噬菌体载体的克隆

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

虽然理论上 M13 重组噬菌体所能携带的外源 DNA 片段没有限制，但实际上是有限的：长片段的外源 DNA 比短片段的更易发生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌体的 DNA 片段不要大于 1000 碱基。而且，当用“正向”或“反向”通用测序引物进行 DNA 测序时，大片段的中心区域可能位于所能测到的区域外。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

M13噬菌体载体的克隆

一、材料 1. 缓冲液和溶液 ATP (10 mmol/L) 乙醇 IPTG ( 20%, m/V) 酚: 氯仿（1:1, V/V) 乙酸钠（3 mol/L，pH 5.2) TE ( pH 7.6 和 pH 8.0) X-gal (2%, m/V) 2. 酶和缓冲液噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶 3. 凝胶琼脂糖凝胶（0.8%) 悬于 1 X TBE