丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
收藏
wx-share
分享

DNA 浓度和纯度的测定

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

暂无

原理

溴化乙锭(EB)是一种嵌入型染料,其上的一个菲啶环可插入到 DNA 或 RNA 链的堆积碱基之间。溴化乙锭的嵌入基团与碱基的接近使二者紧密结合。

DNA 吸收 254 nm 的紫外辐射并传递能量给 EB,而 EB 本身在 302 nm 和 366 nm 处有光吸收。吸收的能量在 590 nm 处释放,并表现为橙红色荧光。结合的 EB 的荧光产率远大于游离 EB 的荧光产率。

EB 结合量的多少与 DNA 的大小和构型有关,而荧光强度正比于嵌入溴化乙锭的量。对于单一构型的同种 DNA 样品来说,溴化乙锭的嵌入量与样品溶液的 DNA 含量成正比。

来源:

操作方法

溴化乙锭法

1、在黑色塑料板上点两排溴化乙锭 2 μl 液滴,每排六点。2、取标准样品 2 μl 与第一排溴化乙锭混匀,使各点的 DNA 浓度分别为 20、15、10、5、2、1(单位:ng/μl)。3、取待测样品经过梯度稀释后,各加 2 μl 于第二排的溴化乙锭上混匀。4、把以上塑料板放到紫外投射仪的样品台上,关好样品室门。以短波紫外光激发荧光,观察每一点的荧光强度或拍照。5、比较上下两排的亮度,确定待测样

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序