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简介
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原理
溴化乙锭(EB)是一种嵌入型染料,其上的一个菲啶环可插入到 DNA 或 RNA 链的堆积碱基之间。溴化乙锭的嵌入基团与碱基的接近使二者紧密结合。
DNA 吸收 254 nm 的紫外辐射并传递能量给 EB,而 EB 本身在 302 nm 和 366 nm 处有光吸收。吸收的能量在 590 nm 处释放,并表现为橙红色荧光。结合的 EB 的荧光产率远大于游离 EB 的荧光产率。
EB 结合量的多少与 DNA 的大小和构型有关,而荧光强度正比于嵌入溴化乙锭的量。对于单一构型的同种 DNA 样品来说,溴化乙锭的嵌入量与样品溶液的 DNA 含量成正比。
来源:
操作方法
1、在黑色塑料板上点两排溴化乙锭 2 μl 液滴,每排六点。2、取标准样品 2 μl 与第一排溴化乙锭混匀,使各点的 DNA 浓度分别为 20、15、10、5、2、1(单位:ng/μl)。3、取待测样品经过梯度稀释后,各加 2 μl 于第二排的溴化乙锭上混匀。4、把以上塑料板放到紫外投射仪的样品台上,关好样品室门。以短波紫外光激发荧光,观察每一点的荧光强度或拍照。5、比较上下两排的亮度,确定待测样
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