流式细胞术

Annexin V/PI 双染法可以用于分析活细胞、凋亡细胞及坏死细胞。由于正常细胞不被染色，凋亡细胞可被标记上 Annexin V，坏死细胞和凋亡晚期细胞可被 PI 染色，因此利用流式细胞术可以将各群细胞明显地区分开来。

流式细胞周期检测是一种常见的检测细胞增殖情况的方法，细胞在不同周期时，其内的 DNA 含量不同。碘化丙啶（PI）作为一种核酸嵌入型染料，能够进入固定后的细胞中，与细胞内的核酸结合，其荧光强度与 DNA 含量成正比。

细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V是一种Ca依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是利用流式细胞仪检测单个微粒（单细胞悬液、生物颗粒等）的多项特性或对特定群体加以分选的一门技术，具有快速、准确、客观的特点，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。

流式细胞仪检测睾丸细胞悬液 DNA 含量的基本过程如下：1、首先制备睾丸组织单细胞悬液：移开睾丸白膜，剪碎输精小管，用含有 0.5％ 胶原酶的 PBS 在 37 ℃ 恒温水浴箱中孵育 15 分钟以释放睾丸细胞。2、轻轻吸取剪碎的组织，PBS 洗涤细胞，800 g 离心沉降 10 分钟。用含 1.0 μg/mL 胰蛋白酶的 PBS 重新悬浮细胞。37 ℃ 再次孵育 15 分钟。3、加入同体积的胰酶大

由于 PS 外化同样存在于失去膜完整性的凋亡晚期细胞和坏死细胞，所以在对凋亡细胞进行流式细胞术分析时，同时应用只对失去膜完整性的细胞染色的活体染料，如碘化丙锭（PI），以区分早期凋亡细胞和凋亡晚期细胞及坏死细胞。细胞发生凋亡时，膜上的 PS 外露早于 DNA 断裂发生，因此膜联蛋白 V 联合 PI 染色法检测早期细胞凋亡较 TUNEL 法更为灵敏。又因为膜联蛋白 V 联合 PI 染色不需固定细胞，

利用流式衰老抗体染色特定组织细胞，随后根据发射光的荧光强度和波长将不同类型衰老细胞分选出来，进一步研究衰老细胞理化性质。

流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型是指当实验中仅需检测特定的某一个或某两个 MHC 的特殊情况下，可以采用流式细胞仪检测特定 MHC 分子的表达的方法来进行分型。

血小板 RNA 含量与血小板生成状态相关，他可以区分是因为骨髓抑制或外周血破坏增加引起的的血小板减少。在放疗后或移植后，网织血小板可以监测巨核细胞和血小板生成状态。

分离肿瘤干细胞的主要思路与分离成体干细胞的思路类似，包括根据特殊的表面标记分子进行分选和 SP 细胞分离。SP（side population）细胞又称为边缘群细胞。用结合 DNA 的荧光染料 Hoechst 33342 处理细胞，利用肿瘤干细胞可将染料泵出细胞的性质，经过荧光活化细胞分选系统（fluo-rescence activated cell sorting，FACS）的分析，将不被染色或

流式细胞术是对悬液中单细胞或生物粒子进行定量分析和分选的技术，具有速度快、精度高、准确性好的优点，广泛应用于细胞计数、细胞分选、分子表型分析、蛋白质工程等研究。

流式细胞仪基于对荧光标记抗原与抗体亚型结合免疫球蛋白作为筛选指标，能够全自动、快速、高效地对针对抗原特异性且活的杂交瘤细胞进行筛选。

红景天苷不仅具有抗衰老、抗抑郁、抗癌、抗缺氧、保护肝脏、改善心脑血管功能和提高中枢神经系统功能等多种药理作用，还可以起到抗疲劳、抗缺氧、抗肿瘤、抗病毒和增强免疫功能的药理作用。巨噬细胞是机体免疫系统的重要递呈细胞，在特异性和非特异性免疫过程中均发挥着重要的作用。

流式细胞仪同步分析 DNA 和 RNA 分析提供了细胞的 DNA 含量和细胞转录状态的信息。这一分析方法可以通过利用与 DNA 结合的异染荧光物质以及由静电作用与单链 RNA 结合的异染荧光物质来检测 DNA 以及 RNA。分析的首要条件就是细胞的活性，所以应该使用新鲜处理的细胞。利用流式细胞仪同时分析 DNA/RNA 技术原先是被用于包括多发性骨髓瘤在内的血液恶性肿瘤的分类及生物学鉴定。

B 淋巴细胞的分离是利用 B 细胞多种生物学特性，如 B 细胞表达 CD19、CD20 分子，具有膜免疫球蛋白等，可将 B 细胞与其他细胞进行分离。

流式细胞术（flowcytometry assay，flow cytometry，FCM）是一种定量分析技术，是指利用流式细胞仪检测细胞内特异标记的荧光信号，从而测定细胞的多种生化物质（如膜蛋白、抗原、离子或 DNA／RNA 水平等）性质的方法，同时也是一项可以把具有相同荧光信号特征的某些细胞亚群从多细胞群体分离出来的细胞分析技术。

采用流式细胞术评估淋巴细胞介导的细胞毒作用，是一个非放射性的以单个细胞为基础的实验，可以研究 CTL 介导的对不同谱系的原代靶细胞的杀伤，检测靶细胞和效应细胞的表型和归宿，阐明细胞毒性淋巴细胞的生物学功能。

流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。FCM所有这些功能的实现依赖于一种特殊的仪器——流式细胞仪，它是综合了激光、电脑、流体力学、光学和荧光细胞学等先进技术的高科技产品。流式细胞主要是测量

基本方案 细胞内因子的荧光标记 材 料 辅 助 方 案 I PM A 和 ionomyciii 激 活 T 细胞 材 料 辅 助 方 案 2 抗 原 活 化 T 细胞 材 料 辅 助 方 案 3 固定和 冻存 PBMC 材 料 辅 助 方 案 4 PBMC 的细胞表面标记 材 料

流式细胞仪（flow cytometer，FCM）又称荧光激活细胞分类仪（fluorescence activited cell sortor，FACS），由光学系统、电子控制系统以及计算机分析系统三个部分组成。