简介
流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型是指当实验中仅需检测特定的某一个或某两个 MHC 的特殊情况下,可以采用流式细胞仪检测特定 MHC 分子的表达的方法来进行分型。
材料与仪器
【器材】
流式专用样品管、离心机、玻璃管、流式细胞仪;
【试剂】
① 特定MHC分子特异性的单克隆抗体、荧光标记的二抗、外周血;
② 洗涤buffer(含2.5%FBS的PBS,FACS buffer);
③ 重悬buffer(2.5%FBS、1%多聚甲醛的PBS)
步骤
流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型的基本过程可分为如下几步:
① 取外周血,分离 PBMC。
② 用 4 ℃ 含 2.5% FBS 的 PBS 洗涤 2 次后,加入特定 MHC 分子特异性的单克隆抗体 100 μl。轻轻混匀后,冰上孵育 20~40 分钟。
③ 用 4 ℃ 含 2.5% FBS 的 PBS 洗涤 2 次后,加入 100 μl 1:50 或 1:100 稀释后的荧光素标记的二抗。轻轻混匀后,冰上孵育 20~40 分钟。
④ 用 4 ℃ 含 2.5% FBS 的 PBS 或 FACS buffer 洗涤 2 次后,用 4 ℃ 含 2.5% FBS、1% 多聚甲醛的 PBS 重悬细胞,流式细胞仪 488 nm 测定平均荧光强度和阳性率。
来源:丁香实验