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合酶链反应-序列特异性引物法对MHC分子进行分型

相关实验:MHC分型实验

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简介

聚合酶链反应-序列特异性引物法对 MHC 分子进行分型是指基于 PCR 反应分析待检组织的 MHC 分子的分型。

原理

聚合酶链反应-序列特异性引物法对 MHC 分子进行分型的基本原理是设计出一整套 MHC 各等位基因座位的序列特异性引物(sequence-specific primer,SSP),通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)特异性扩增待检组织细胞基因组 DNA 的相应靶序列,电泳后分析 PCR 扩增产物的带型,确定相应等位基因的型别。

材料与仪器

器材:

PCR 仪、电泳仪。

试剂:

① MHC 各等位基因座位的序列特异性引物;

② 高保真 DNA 聚合酶、dNTPs 和 buffer 等;

③ 基因组 DNA 抽提试剂盒;

④ 琼脂糖和 1 × TAE 等核酸电泳材料。

步骤

聚合酶链反应-序列特异性引物法的基本过程可分为如下几步:

A 获取待检组织、细胞,抽提基因组 DNA。

B 以抽提的基因组 DNA 为模板,利用设计的一整套序列特异性引物,通过 PCR 进行特异性扩增。

注意:由于 MHC 分子的高度多态性,要确定同一等位基因中的各型别则必须设计多个引物对。

C 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,分析扩增产物的电泳条带,确定待检组织、细胞的 MHC 型别。

来源:丁香实验

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