MHC分型实验

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

MHC 分型是指通过对外周血、细胞或机体中 MHC 进行分析，以辅助进行 T 细胞表位鉴定。

原理

MHC 分型之血清学方法的基本原理是指从外周血中分离到 PBMC 之后，通过加入已知 MHC 抗血清，孵育后加入染料染色，通过抗原和抗体的特异性反应，采用微量淋巴细胞毒实验或补体依赖细胞毒实验，从而对 MHC 进行分型的方法。血清学方法根据要检测 MHC 分子类型不同，又可分为 MHCI 类分子分型、MHC II 类分子分型和特定 MHC 分子分型三种方法。

MHC 分型之聚合酶链反应-序列特异性引物法的原理是设计出一整套 MHC 各等位基因座位的序列特异性引物（sequence-specific primer，SSP），通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）特异性扩增待检组织细胞基因组 DNA 的相应靶序列，电泳后分析 PCR 扩增产物的带型，确定相应等位基因的型别。该方法的优点是快速、准确。

来源：丁香实验团队

操作方法

血清学法对MHC I类分子分型

MHC I 类分子的分型是指采用微量淋巴细胞毒实验或补体依赖细胞毒实验，对 MHC I 类分子进行分型的方法。

血清学法对MHC II类分子分型

MHC II 类分子分型的基本过程可分为如下几步：① 取外周血，分离 PBMC，进一步分出纯的 B 细胞。② 将已知 MHC 抗血清与血小板孵育，去除其中的抗 MHC I 类分子的抗体，而后向 B 细胞中加入上述 MHC 抗血清，20 ℃ 孵育 60 分钟后，加入补体，37 ℃ 孵育 60 分钟。③ 加入染料，在倒置显微镜下观察结果，细胞着色则为阳性，表示待检 B 表面具有已知抗血清所针对的抗原。

流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型

流式细胞术对特定 MHC 分子进行分型是指当实验中仅需检测特定的某一个或某两个 MHC 的特殊情况下，可以采用流式细胞仪检测特定 MHC 分子的表达的方法来进行分型。

合酶链反应-序列特异性引物法对MHC分子进行分型

聚合酶链反应-序列特异性引物法对 MHC 分子进行分型是指基于 PCR 反应分析待检组织的 MHC 分子的分型。