原理
MHC II 类分子分型的基本原理是指从外周血中分离到纯的 B 细胞,而后通过加入已知 MHC 抗血清(先用血小板吸收去除其中的抗 MHC I 类分子的抗体),孵育后加入染料染色,通过抗原和抗体的特异性反应,从而对 MHC II 类分子进行分型的方法。
材料与仪器
器材:
倒置显微镜。
试剂:
① 外周血,纯的 B 细胞;
② 用血小板处理后的 MHC 抗血清;
③ 补体;
④ 荧光染料。
步骤
MHC II 类分子分型的基本过程可分为如下几步:
① 取外周血,分离 PBMC,进一步分出纯的 B 细胞。
② 将已知 MHC 抗血清与血小板孵育,去除其中的抗 MHC I 类分子的抗体,而后向 B 细胞中加入上述 MHC 抗血清,20 ℃ 孵育 60 分钟后,加入补体,37 ℃ 孵育 60 分钟。
③ 加入染料,在倒置显微镜下观察结果,细胞着色则为阳性,表示待检 B 表面具有已知抗血清所针对的抗原。
来源:丁香实验