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流式细胞术

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问关于流式细胞术补偿调节问题

静心观照

1、需要设置单染管，但通常是对照组设置单染管。2、可以使用PBS稀释细胞悬液；也可以接种的时候适当增加细胞接种密度，上机的时候使用低速跑。3、未染色的管是双阴管，两种染料都不染，此管主要用来圈门，确定大部分细胞的位置；通常也是对照组设双阴管。4、FSC-SSC，调节的原则是上下左右都不压线，如果细胞比较小，可以选择不同的模式，适当放大信号，细胞分群就会比较明显了。6、个人使用过Biolegend这

3 回答769 围观

问细胞生物标记物检测的方法:WB法和流式细胞仪，单用一个就行?还是必须联合使用

listener0014

另外一个也看经费是否充足，如果不差钱，肯定是越全越好

4 回答409 围观

问流式细胞仪标本的制备的具体步骤是什么？

我是金博士

1.收集细胞。上皮细胞需要蛋白酶消化，然后收集。加PBS或者流式洗液 1ml ，振荡，1400rpm 离心5min ，弃上清。2.染表型悬浮细胞于100ul体积，细胞浓度约为或者小于 1X10^6,加入流式染色抗体。按照说明书用量或者减半（根据经验）。分出一管作为同型3. 4度，避光30min，用PBS 洗一遍，1400rpm 离心5min ，弃上清。4. 破膜破膜剂以BD pharming

1 回答1135 围观

问请问单细胞测序技术，用流式细胞术挑选完免疫细胞后，为什么再进行聚类，有的免疫细胞又被划分成其他种类的免疫细胞了。

whilt-shirt

在进行流式细胞术的数据分析时，圈门的方式和逻辑体现了我们对数据把控的准确性，以及对客观数据的理解性。所以建议在数据分析前一定要自己去搞清楚指标和指标的关系，再来按照一定的逻辑进行圈门才会获得比较客观严谨的结果。首先我们要知道，通常展示的结果大部分的时候都只是流式结果的一小部分，比如我们对一个细胞进行双染，流式的结果信息就有4个，即这群细胞双染的双阳群1个，双阴群1个，单阳群2个；那3染呢？即三阳1

1 回答491 围观

问如何提高实验数据准确性？

小兮的十八天

实验设计无误，保证实验操作步骤标准无遗漏，至少设置三次重复实验。

4 回答1216 围观

问胰腺组织样本如何处理？

郭郭的郭郭

胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。胰腺组织含多种类型的细胞，要想提取胰岛A细胞的RNA，首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来，可以用流式细胞分选或磁珠分选等。获得高纯度的胰岛A细胞后，再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了。

3 回答1001 围观

问用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白，两者操作过程有哪些不同？

小暮

原理都是一样的，就是固定方式不一样，细胞固定多用甲醛，组织切片固定多用多聚甲醛

2 回答583 围观

问流式实验的时候FCblocker 和FVD活性染料哪一个应该先放。

peaceful13

先染FVD死活，因为这个是染料会跟蛋白或者抗体结合，所以需要在无蛋白的缓冲液进行染色，Fcblocker主要成份刚好就是蛋白或者抗体，所以需要先染死活

2 回答689 围观

问通过染色进行的细胞分选一直不太成功请问注意事项？

Kimser

样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些，因为在分选过程中，血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度，并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。

4 回答810 围观

问双荧光染色标记后细胞流式实验以及结果分析需要的注意事项?

府宅

每次试验均需设置以下三种对照：（1）阳性对照：阳性血清+荧光标记物；（2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物；（3）荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。

7 回答1378 围观

问请问现在T细胞常见的抗体有哪些？

府宅

T 细胞（全部）CD3细胞膜细胞膜受体杀伤性 T 细胞CD8细胞膜细胞膜受体杀伤性 T 细胞IFNγ, TNF分泌细胞因子杀伤性 T 细胞EOMES

3 回答686 围观

问流式细胞术最多能用几种抗体去筛选t细胞

府宅

淋巴细胞4.CD3 + T淋巴细胞5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞

4 回答641 围观

问求助！药物诱导细胞凋亡的实验，请求解答

小小袋袋

Q2+ Q4就是所有凋亡的细胞率，spss后续可以对组间进行t检验或者秩和分析，一次不够，我觉得最少三次

1 回答651 围观

问破膜固定处理后的细胞还能上流式细胞仪进行细胞分选吗？死活染料能区分在破膜固定前的死活细胞吗？

小小袋袋

细胞分选和破膜固定理论上不冲突，我觉得死活染料可以区分，但需要注意荧光是否会影响后续实验

3 回答1584 围观

问流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙？

崔果儿

加氯化钙的目的应该是使细胞内钙达到饱和

3 回答568 围观

问流式细胞周期结果没有S期，是什么原因

笑嘎嘎

2 回答4348 围观

问流式细胞仪跑出的图流式细胞图分群不明显怎么办？

Ethan2007

又仔细查了下资料，分群不明显还有可能是抗体的荧光强度较弱，可选用强荧光的抗体。另外，在染色时，抗体的加入量不合适也可能造成分群不明显。可以考虑做一个浓度梯度，以找到合适的抗体浓度。

3 回答6682 围观

问流式细胞术检测GFP转染的效率相关问题

amethyst2003

一般的话流式检测的细胞数是10000－20000，具体看参数设置了，建议用PBS重悬，一般是不需要固定的，检测所用为第一通道，单色荧光不难的，做一次就知道了。好运哦

1 回答843 围观

问流式细胞图怎么看

yanlai000

先看物理参数的图，即FSC和SSC的图。FSC，即前向角散射，它的值代表细胞的大小，可以利用FSC值对细胞进行分群和分类。SSC，即侧向角散射，它的值代表细胞的颗粒度（granularity），可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度，利用SSC值对细胞进行分群和分类。然后看荧光通道的图，以CD3为横轴，CD8为纵轴为例子，画十字门后分为四个限象Q1-Q2-Q3-Q4，其分别代表Q1(CD4-C

2 回答1188 围观

问流式与werstern的区别？

sk1981521

1、Western 是检测蛋白表达的金标准，可用于检测细胞多种类型的蛋白；流式细胞术的方法多用于检测细胞膜蛋白，虽然也可通过Triton-X100给细胞打孔的方法来检测胞内蛋白，但对于分泌蛋白却是无能为力的； 2、Western测蛋白含量对抗体的量需要很少，一般1：1000左右，而流式对抗体的需要量很大，一般1：50（很浪费抗体）； 3、采用Western方法检测细胞蛋白含量的变化一般要有内参，而

13 回答1573 围观

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