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流式细胞术
流式细胞术
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实验方法
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问
关于流式细胞术补偿调节问题
静心观照
1、需要设置单染管,但通常是对照组设置单染管。2、可以使用PBS稀释细胞悬液;也可以接种的时候适当增加细胞接种密度,上机的时候使用低速跑。3、未染色的管是双阴管,两种染料都不染,此管主要用来圈门,确定大部分细胞的位置;通常也是对照组设双阴管。4、FSC-SSC,调节的原则是上下左右都不压线,如果细胞比较小,可以选择不同的模式,适当放大信号,细胞分群就会比较明显了。6、个人使用过Biolegend这
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836 围观
问
细胞生物标记物检测的方法:WB法和流式细胞仪,单用一个就行?还是必须联合使用
listener0014
另外一个也看经费是否充足,如果不差钱,肯定是越全越好
4 回答
422 围观
问
流式细胞仪标本的制备的具体步骤是什么?
我是金博士
1.收集细胞。上皮细胞需要蛋白酶消化,然后收集。加PBS或者流式洗液 1ml ,振荡,1400rpm 离心5min ,弃上清。2.染表型悬浮细胞于100ul体积,细胞浓度约为或者小于 1X10^6,加入流式染色抗体。按照说明书用量或者减半(根据经验)。分出一管作为同型3. 4度 ,避光30min, 用PBS 洗一遍,1400rpm 离心5min ,弃上清。4. 破膜破膜剂 以BD pharming
1 回答
1159 围观
问
请问单细胞测序技术,用流式细胞术挑选完免疫细胞后,为什么再进行聚类,有的免疫细胞又被划分成其他种类的免疫细胞了。
whilt-shirt
在进行流式细胞术的数据分析时,圈门的方式和逻辑体现了我们对数据把控的准确性,以及对客观数据的理解性。所以建议在数据分析前一定要自己去搞清楚指标和指标的关系,再来按照一定的逻辑进行圈门才会获得比较客观严谨的结果。首先我们要知道,通常展示的结果大部分的时候都只是流式结果的一小部分,比如我们对一个细胞进行双染,流式的结果信息就有4个,即这群细胞双染的双阳群1个,双阴群1个,单阳群2个;那3染呢?即三阳1
1 回答
499 围观
问
如何提高实验数据准确性?
小兮的十八天
实验设计无误,保证实验操作步骤标准无遗漏,至少设置三次重复实验。
4 回答
1357 围观
问
胰腺组织样本如何处理?
郭郭的郭郭
胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。胰腺组织含多种类型的细胞,要想提取胰岛A细胞的RNA,首先就必须将胰岛A细胞从胰腺组织的细胞群中分离出来,可以用流式细胞分选或磁珠分选等。 获得高纯度的胰岛A细胞后,再用TRIZOL或RNA提取试剂盒等将其RNA提取出来就行了。
3 回答
1066 围观
问
用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白,两者操作过程有哪些不同?
小暮
原理都是一样的,就是固定方式不一样,细胞固定多用甲醛,组织切片固定多用多聚甲醛
2 回答
597 围观
问
流式实验的时候FCblocker 和FVD活性染料哪一个应该先放。
peaceful13
先染FVD死活,因为这个是染料会跟蛋白或者抗体结合,所以需要在无蛋白的缓冲液进行染色,Fcblocker主要成份刚好就是蛋白或者抗体,所以需要先染死活
2 回答
771 围观
问
通过染色进行的细胞分选一直不太成功 请问注意事项?
Kimser
样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些,因为在分选过程中,血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度,并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。
4 回答
835 围观
问
双荧光染色标记后细胞流式实验以及结果分析需要的注意事项?
府宅
每次试验均需设置以下三种对照: (1) 阳性对照:阳性血清+荧光标记物; (2) 阴性对照:阴性血清+荧光标记物; (3) 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物。
7 回答
1426 围观
问
请问现在T细胞常见的抗体有哪些?
府宅
T 细胞(全部)CD3细胞膜细胞膜受体杀伤性 T 细胞CD8细胞膜细胞膜受体杀伤性 T 细胞IFNγ, TNF分泌细胞因子杀伤性 T 细胞EOMES
3 回答
716 围观
问
流式细胞术最多能用几种抗体去筛选t细胞
府宅
淋巴细胞4.CD3 + T淋巴细胞5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞
4 回答
656 围观
问
求助!药物诱导细胞凋亡的实验,请求解答
小小袋袋
Q2+ Q4就是所有凋亡的细胞率,spss后续可以对组间进行t检验或者秩和分析,一次不够,我觉得最少三次
1 回答
664 围观
问
破膜固定处理后的细胞还能上流式细胞仪进行细胞分选吗?死活染料能区分在破膜固定前的死活细胞吗?
小小袋袋
细胞分选和破膜固定理论上不冲突,我觉得死活染料可以区分,但需要注意荧光是否会影响后续实验
3 回答
1668 围观
问
流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙?
崔果儿
加氯化钙的目的应该是使细胞内钙达到饱和
3 回答
635 围观
问
流式细胞周期结果没有S期,是什么原因
笑嘎嘎
如图:
2 回答
4419 围观
问
流式细胞仪跑出的图流式细胞图分群不明显怎么办?
Ethan2007
又仔细查了下资料,分群不明显还有可能是抗体的荧光强度较弱,可选用强荧光的抗体。另外,在染色时,抗体的加入量不合适也可能造成分群不明显。可以考虑做一个浓度梯度,以找到合适的抗体浓度。
3 回答
6829 围观
问
流式细胞术检测GFP转染的效率相关问题
amethyst2003
一般的话流式检测的细胞数是10000-20000,具体看参数设置了,建议用PBS重悬,一般是不需要固定的,检测所用为第一通道,单色荧光不难的,做一次就知道了。好运哦
1 回答
891 围观
问
流式细胞图怎么看
yanlai000
先看物理参数的图,即FSC和SSC的图。FSC,即前向角散射,它的值代表细胞的大小,可以利用FSC值对细胞进行分群和分类。SSC,即侧向角散射,它的值代表细胞的颗粒度(granularity),可以利用细胞的SSC值初步比较细胞的颗粒度,利用SSC值对细胞进行分群和分类。然后看荧光通道的图,以CD3为横轴,CD8为纵轴为例子,画十字门后分为四个限象Q1-Q2-Q3-Q4,其分别代表Q1(CD4-C
2 回答
1207 围观
问
流式与werstern的区别?
sk1981521
1、Western 是检测蛋白表达的金标准,可用于检测细胞多种类型的蛋白;流式细胞术的方法多用于检测细胞膜蛋白,虽然也可通过Triton-X100给细胞打孔的方法来检测胞内蛋白,但对于分泌蛋白却是无能为力的; 2、Western测蛋白含量对抗体的量需要很少,一般1:1000左右,而流式对抗体的需要量很大,一般1:50(很浪费抗体); 3、采用Western方法检测细胞蛋白含量的变化一般要有内参,而
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