流式细胞仪标本的制备的具体步骤是什么？

1.收集细胞。上皮细胞需要蛋白酶消化，然后收集。加PBS或者流式洗液 1ml ，振荡，1400rpm 离心5min ，弃上清。

2.染表型悬浮细胞于100ul体积，细胞浓度约为或者小于 1X10^6,加入流式染色抗体。按照说明书用量或者减半（根据经验）。分出一管作为同型

3. 4度 ，避光30min， 用PBS 洗一遍，1400rpm 离心5min ，弃上清。

4. 破膜破膜剂 以BD pharmingen 破膜剂为例，加300ul 4度 ，避光30min以现配的破膜洗液 1ml 洗一遍。1400rpm 离心5min ，弃上清。

5.胞内染色加入流式抗体 4度 ，避光30min。用破膜洗液1ml 洗一遍，1400rpm 离心5min ，弃上清。

6. 加入200ul 1～2％多聚甲醛 4度 避光保存。一般情况下，可直接把抗体加入到弃上清后的残留液里（体积大概为50ul左右）。

以上是我们实验室的操作步骤。一般情况抗体都附带的染色步骤，可以作为参考。