府宅
每次试验均需设置以下三种对照:
(1) 阳性对照:阳性血清+荧光标记物;
(2) 阴性对照:阴性血清+荧光标记物;
(3) 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物。
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荧光染色后一般在1h内完成观察,或于4℃保存4h,时间过长,可能会使荧光提前衰退。
小暮
在细胞制备、培养阶段,如果该培养细胞是贴壁细胞,需用先用胰酶消化细胞,然后收集待测样品细胞,离心、洗涤、封闭后标记荧光素偶联抗体即可。
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除研究对象外,其他条件均保持一致的对照实验组,用来确定染色特异性和实验结果的可靠性,如检测刺激后抗原表达量,以未刺激的样本做对照。
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荧光染色后一般在1h内完成观察,或于4℃保存4h,时间过长,可能会使荧光提前衰退。
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调节电压时,如果检测的目标细胞体积较小,可以适当提高电压值,使目标细胞与细胞碎片在流式图中能够完全分离;如果检测的目标细胞体积较大,可以适当降低电压值,使所有的目标细胞群完整显示于流式图中,防止细胞群接近于流式图的边界而变形扭曲或者完全处于边界外。
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1. 在实验过程中,在保证实验的科学性和准确性的基础上,应尽量减少实验工 序和过程。由于间接标记法的工序多,实验过程长,如再加之操作的不熟练, 细胞更容易丢失和受损,而造成实验结果的误差。因此,在条件允许的范围 内,建议尽量做直接标记法而不去做间接标记法,以保证实验的真实性和准 确性。
2. 建议送检细胞一定要足够量,一般要求 1×106 个细胞。不要过少。因为,如 细胞太少检测时样本流量相对会增大从而影响变异系数,结果也不可信。细 胞量也不宜过多,因细胞量太多加入的抗体或染料相对不足,结果也由此受影响。
3. 同一种细胞需同时做双标记时,须做双标记的同型对照,且两种抗体所标记 的荧光颜色务必不同。
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