关于流式细胞术补偿调节问题

1、需要设置单染管，但通常是对照组设置单染管。

2、可以使用PBS稀释细胞悬液；也可以接种的时候适当增加细胞接种密度，上机的时候使用低速跑。

3、未染色的管是双阴管，两种染料都不染，此管主要用来圈门，确定大部分细胞的位置；通常也是对照组设双阴管。

4、FSC-SSC，调节的原则是上下左右都不压线，如果细胞比较小，可以选择不同的模式，适当放大信号，细胞分群就会比较明显了。

6、个人使用过Biolegend这个牌子的染料标记活细胞，效果还可以，仅供参考。

问题1: 对于明确病毒对细胞凋亡的影响，可以使用双染管接毒细胞。双染管可同时染色细胞表面的磷脂酰丝氨酸（PS）和核酸，以区分凋亡细胞和存活细胞。这样可以更准确地评估病毒对细胞凋亡的影响。

问题2: 如果细胞悬液的体积在进样过程中很快消失，你可以考虑将细胞悬液进行适当的稀释。通过稀释，你可以增加样品的体积，并确保足够的样品进入流式细胞仪进行分析。

问题3: 是的，未染色的管也需要使用染色结合液进行处理，只是在此步骤中不加入染料。染色结合液有助于保持细胞在染色过程中的适宜条件，并防止细胞的凋亡。

问题4: FSC（Forward Scatter）和SSC（Side Scatter）是流式细胞仪中常用的参数，用于测量细胞的大小和复杂度。调节FSC-SSC电流电压可以使细胞在散点图上分布得更明显。一般来说，如果你想更好地区分不同细胞群，可以适当增加电压，但需谨慎，避免产生过多的误差或噪音。

问题5: 如果你使用单染管时，另一个染色的直方图不在10^3附近，可能是某些实验条件或操作不准确导致的。你可以尝试重新优化流式细胞仪的设置，例如调整激光强度、增加或减少增益等，以获得更好的染色结果。此外，确保染色试剂的质量良好，并按照说明书的建议使用。

问题6: 如果使用荧光抗体标记细胞，通常需要先染死活细胞以区分它们。可以使用活细胞和/或死细胞标记试剂，例如细胞膜渗透性染料（如Propidium Iodide，PI）或细胞膜不渗透性染料（如DAPI），以区分存活和死亡细胞。具体使用哪种标记试剂取决于实验的需要和细胞类型。

接病毒建议细胞设置单染管进行。