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关于流式细胞术补偿调节问题

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dxy_r8ysszr4

实验目的:明确病毒对细胞凋亡的影响。我用的碧云天AnnexinV-FITC试剂盒,我理解的说明书上正常细胞(不染色的管、PI单染、FITC单染、双染的管),接毒细胞的双染管。

问题1:接毒细胞是否细胞设置单染管?

问题2:染完色用200μL的细胞悬液,进样时候很快就没啦,有什么稀释的方法使液体量变多嘛?

问题3:未染色的管是不是也用染色结合液处理,只不过不加两种染料?

问题4:FSC-SSC电流电压怎么调节使细胞分群明显,怎么看该调大还是调小?

问题5:我用单染管调电压时,另一个染色的直方图就不在10^3附近,怎么解决?

问题6:如果用荧光抗体标记,在染色时是否需要染死活细胞,有推荐的品牌嘛?

求大佬们指点,谢谢大家!

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3 个回答

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静心观照

有帮助

1、需要设置单染管,但通常是对照组设置单染管。

2、可以使用PBS稀释细胞悬液;也可以接种的时候适当增加细胞接种密度,上机的时候使用低速跑。

3、未染色的管是双阴管,两种染料都不染,此管主要用来圈门,确定大部分细胞的位置;通常也是对照组设双阴管。

4、FSC-SSC,调节的原则是上下左右都不压线,如果细胞比较小,可以选择不同的模式,适当放大信号,细胞分群就会比较明显了。

6、个人使用过Biolegend这个牌子的染料标记活细胞,效果还可以,仅供参考。

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loveliufudan

有帮助

问题1: 对于明确病毒对细胞凋亡的影响,可以使用双染管接毒细胞。双染管可同时染色细胞表面的磷脂酰丝氨酸(PS)和核酸,以区分凋亡细胞和存活细胞。这样可以更准确地评估病毒对细胞凋亡的影响。

问题2: 如果细胞悬液的体积在进样过程中很快消失,你可以考虑将细胞悬液进行适当的稀释。通过稀释,你可以增加样品的体积,并确保足够的样品进入流式细胞仪进行分析。

问题3: 是的,未染色的管也需要使用染色结合液进行处理,只是在此步骤中不加入染料。染色结合液有助于保持细胞在染色过程中的适宜条件,并防止细胞的凋亡。

问题4: FSC(Forward Scatter)和SSC(Side Scatter)是流式细胞仪中常用的参数,用于测量细胞的大小和复杂度。调节FSC-SSC电流电压可以使细胞在散点图上分布得更明显。一般来说,如果你想更好地区分不同细胞群,可以适当增加电压,但需谨慎,避免产生过多的误差或噪音。

问题5: 如果你使用单染管时,另一个染色的直方图不在10^3附近,可能是某些实验条件或操作不准确导致的。你可以尝试重新优化流式细胞仪的设置,例如调整激光强度、增加或减少增益等,以获得更好的染色结果。此外,确保染色试剂的质量良好,并按照说明书的建议使用。

问题6: 如果使用荧光抗体标记细胞,通常需要先染死活细胞以区分它们。可以使用活细胞和/或死细胞标记试剂,例如细胞膜渗透性染料(如Propidium Iodide,PI)或细胞膜不渗透性染料(如DAPI),以区分存活和死亡细胞。具体使用哪种标记试剂取决于实验的需要和细胞类型。

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huarenqiang5

有帮助

接病毒建议细胞设置单染管进行。

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