液氮研磨法

【材料】组织 【仪器，耗材】研钵、镊子、剪刀、75%的酒精、无尘纸巾、专用容器盛液氮。

液氮容器的准备 液氮一般保存于液氮罐中。实验前先准备一个保温桶,将适量液氮转移至保温桶中,同时还要准备一个不锈钢或塑料汤勺,汤勺的柄不够长时要想办法加长,以免冻伤手。 组织的处理及用量 任何组织在获得后如不立即使用,要尽快保存在低温环境中(一196℃液氮中速冻,一70℃保存)。使用时,植物组织应当先用自来水清洗外表的泥沙,用单蒸水冲洗两遍,用75%乙醇浸洗约30秒,再用灭菌双蒸水冲洗两遍,用无菌滤纸吸干,然后根据需要取适当部位的组织。动物组织不必清洗,但要尽量剔除周边的组织及血块。组织的取量要比实际需要量大1一2倍,因为研磨时部分组织会粘在研钵和研棒上,会致部分组织样本丢失 研钵的固定 我们在实验时发现,研钵在加液氮后温度很低,外表会形成许多冰晶,用力研磨组织时易打滑,研钵内的组织液氮混合物很容易溅出,造成组织丢失,也容易冻伤手。如果在研钵下垫些纱布或滤纸,虽不易滑动,但由于缓冲作用,研磨时不受力,不足取。后来我们作了如下改进:一是做个木支架,即选一块厚约两寸的木板,在上面挖个半球形圆洞(大小根据研钵大小而定),木板两端留一定长度以备手握之用,使用时将研钵卡在半球形洞中,既稳当又不会冻伤手;二是备一条干净的毛巾或纱布(干的),折成长条形,将研钵包围起来,两端合并后用手抓住,这个方法简单实用,但要特别小心,以免冻伤。 研磨方法 空钵先用液氮预冷,再将研棒的上端用纱布包裹(用力时手不会痛),组织最好切成薄片,研磨时不易溅出,也更容易磨碎,研棒最好顶着手心,这样便于用力。研磨过程中要避免液氮干涸,研磨至细粉即可。待液氮刚蒸发完时,用一个小药勺取出所需用量进行下一步实验,或者将组织粉末装人容器内,保存于一70℃的温度下,以备下一步实验用。使用得当的液氮研磨组织法,将为下一步实验成功奠定了基础。值得一提的是,操作中所有接触的器皿及耗材须清洗干净并消毒。如果研磨组织用于提取RNA时,使用的器皿及耗材必须采用焦碳酸二乙醋(DEPC)灭活RNase并进行高压消毒处理。

把样品放入研钵中，倒入少量液氮，液氮就会像沸腾了一样，这时候迅速研磨。动作一定不要太大，最好是用手心的力量往下旋转着碾碎，动作太大会把样品溅飞，如果样品量很少直接就可能磨没了。大约几秒沸腾就结束，再磨几下就可以再加入点液氮，重复以上过程，直到认为磨得比较细了为止。 液态氮在常压时的温度相当的低，一旦与物体表面接触将迅速地沸腾，同时也会带走相当大量的热能。 因此，使用液态氮时须额外注意，避免与皮肤的直接接触。 装填时应穿戴护具，如：防冻手套。切忌使用棉质手套，棉质手套会借由毛细现象吸著大量的液态氮而提高冻伤的可能性(甚至比不穿戴还要危险)。 研钵要用瓷质的，当然研杵也一样，倒液氮的量要视你研钵的大小和实验材料的量而定，建议你用小一点的研钵，这样研磨的时候材料比较集中好研一点，液氮倒研钵体积的一半即可。