酵母破壁液氮研磨法

问：求教酵母破壁的液氮研磨方法的详细步骤，需要什么试剂？

答：取1L酵母，诱导完后，离心（centrifugation）收菌体，称湿重，用蛋白（protein）纯化buffer悬浮菌体，重量（g）：buffer体积（毫升）＝1：1－－1：2。用注射器将菌液加入液氮中，控制加入速度，使得菌液进入液氮中后形成小颗粒,太快容易结成块。将菌体液氮颗粒转入高速打碎器（用的是打碎草药的机器，RMB600）中，注意不要将多余液氮倒入，大约2－3万转/分破碎1分钟，菌体颗粒应该成粉末状。倒出粉末，37度水浴融化后，再用注射器加入液氮中，重复上述步骤，重复3次。高速（20000rpm，4度30分）离心（centrifugation）收上清，如上清杂质较多，需要多离几遍，上清中目标蛋白（protein）纯化同E.coli.