丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

酵母细胞破壁之液氮研磨法

互联网

2437
相关专题
完美酵母质粒提取实验Protocol

问: 求教酵母 破壁的液氮研磨方法的详细步骤,需要什么试剂?

答: 取1L酵母,诱导完后,离心(centrifugation)收菌体,称湿重,用蛋白 (protein)纯化buffer悬浮菌体,重量(g):buffer体积(毫升)=1:1--1:2.用注射器将菌液加入液氮中,控制加入速度,使得菌液进入液氮中后形成小颗粒,太快容易结成块.将菌体液氮颗粒转入高速打碎器(用的是打碎草药的机器,RMB600)中,注意不要将多余液氮倒入,大约2-3万转/分破碎1分钟,菌体颗粒应该成粉末状.倒出粉末,37度水浴融化后,再用注射器加入液氮中,重复上述步骤,重复3次.高速(20000rpm,4度30分)离心(centrifugation)收上清,如上清杂质较多,需要多离几遍,上清中目标蛋白(protein)纯化同E.coli.

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序