酵母细胞破壁之液氮研磨法

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问: 求教酵母 破壁的液氮研磨方法的详细步骤,需要什么试剂?

答: 取1L酵母,诱导完后,离心(centrifugation)收菌体,称湿重,用蛋白 (protein)纯化buffer悬浮菌体,重量(g):buffer体积(毫升)=1:1--1:2.用注射器将菌液加入液氮中,控制加入速度,使得菌液进入液氮中后形成小颗粒,太快容易结成块.将菌体液氮颗粒转入高速打碎器(用的是打碎草药的机器,RMB600)中,注意不要将多余液氮倒入,大约2-3万转/分破碎1分钟,菌体颗粒应该成粉末状.倒出粉末,37度水浴融化后,再用注射器加入液氮中,重复上述步骤,重复3次.高速(20000rpm,4度30分)离心(centrifugation)收上清,如上清杂质较多,需要多离几遍,上清中目标蛋白(protein)纯化同E.coli.