用流式细胞术计数网织血小板

血小板 RNA 含量与血小板生成状态相关，他可以区分是因为骨髓抑制或外周血破坏增加引起的的血小板减少。在放疗后或移植后，网织血小板可以监测巨核细胞和血小板生成状态。

试剂：EDTA、甲醛、Tyrode 缓冲液、噻唑橙染液；
仪器：流式细胞仪；

1、制备富含血小板血浆：将 EDTA 抗凝全血 500 r/min 离心 8 min，取出上层含血小板血浆，2000 r/min 离心10 min，弃上清液，底层血小板用柠檬酸钠葡萄糖 EDTA 缓冲液（pH 7.4）再悬浮，并洗 1 次，再用 Tyrode 缓冲液（含牛血清白蛋白和 EDTA）洗 2 次，再悬浮在 Tyrode 缓冲液中，调整血小板浓度为 100 x 10⁹ /L 作为样品。

2、醛化固定：向标本加入 1% 甲醛，在 4℃ 放置 2 h 以上，以固定血小板。检测前用 Tyrode 缓冲液洗一次。

3、染色计数：向 50 ul 经过醛化固定的血小板悬液加 450 ul 噻唑橙染液，放置室温暗处 1~2 h，用流式细胞仪测定 525 nm 波长处的荧光强度，代表 RP 数量。同时计数血小板总数，计算得知 RP 的比值。这即 RP 的半自动计数法。因为该法采用噻唑橙染色，被染色的血小板又称为噻唑橙阳性血小板（TO⁺ 血小板）。