登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
首页
|
实验问答
|
PCR
实验问答
15,016,519 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
有谁知道哪个老师或者实验室有做LncRNA PCR 实验?
毛利小五郎的徒弟
这个可以问一下大学附属的实验室,一般都可以做。
3 回答
224 围观
3 回答
224 围观
去回答
问
第一次要自己设计实验 想请问有没有人做过金纳米颗粒 PCR ?是否有详细的步骤能参考?
loveliufudan
金纳米颗粒PCR(Gold Nanoparticle PCR)是一种利用金纳米颗粒作为PCR信号放大的探针,其灵敏度高于传统PCR。下面是一些步骤和建议,供您参考:1.准备PCR反应体系:根据实验需要,制备PCR反应体系,通常包括PCR引物、dNTP、Taq聚合酶、MgCl2和PCR缓冲液等。可根据实验需要,将金纳米颗粒直接加入PCR反应体系中,或使用金纳米颗粒探针。2.制备金纳米颗粒探针:金纳米
3 回答
186 围观
3 回答
186 围观
去回答
问
构建基因修饰小鼠的话,如何确定不同种属间的同源位点选择。
sswei
使用R包homologene来查找不同种属间的同源位点选择。
3 回答
222 围观
3 回答
222 围观
去回答
问
定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影
loveliufudan
定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影可能会影响结果的准确性,建议排除掉拖影问题后再进行数据分析。拖影一般是由于PCR反应过程中,引物结合到非特异性模板上扩增所导致的。这种非特异性扩增可能是由于PCR反应条件不恰当或引物设计不合理所导致的。以下是一些可能导致PCR反应中出现拖影的原因和解决方法:PCR反应条件不恰当:PCR反应温度过低或时间过长,会导致扩增产物不特异性地结合到非特定的模板上,从而导致
3 回答
234 围观
3 回答
234 围观
去回答
问
荧光定量的曲线是这样的,是不是证明这个引物不特异呀
loveliufudan
可能是引物不特异,但也有其他可能的原因。以下是一些可能导致PCR曲线出现此类现象的原因:引物设计不合理:引物设计可能存在一些问题,如引物长度、序列不合适等,会导致引物与非特定模板结合并扩增,从而导致此结果。模板DNA存在杂质:模板DNA存在杂质可能会导致PCR反应出现此类现象。例如,存在其他DNA片段或残留的基因组DNA片段可能会被引物扩增,从而产生这种结果。反应条件不合适:PCR反应的温度、时间
4 回答
147 围观
4 回答
147 围观
去回答
问
qpcr结果可以绘制ROC曲线吗
dxyc42u
单纯的只有qpcr曲线无法做ROC曲线
4 回答
481 围观
4 回答
481 围观
去回答
问
小鼠骨骼pcr与正常组织pcr的实验步骤的异同之处及注意事项?
z流沙z
主要就是研磨,其他和正常组织提取RNA一样
3 回答
356 围观
3 回答
356 围观
去回答
问
补实验的时候,以及想把同一材料的多个基因的表达放一张图,以看出来趋势的时候,如何进行板间校正?
毛利小五郎的徒弟
可以用image做板间校正,把所有结果放在一张图上
3 回答
812 围观
3 回答
812 围观
去回答
问
如果RNA提取浓度太低(甚至达不到逆转要求的量)的情况下,定量是不是只能靠cDNA浓度?
毛利小五郎的徒弟
如果rna浓度太低,可以靠cdna进行定量,但如果二者浓度差异太大,结果误差也会增高。
4 回答
832 围观
4 回答
832 围观
去回答
问
同一个样本做同一个基因,做了两个复孔,但是一个孔溶解曲线的温度是81.5,另外一个孔是81度,这是为什么呢?(溶解曲线都是单峰)
毛利小五郎的徒弟
设置的问题,溶解会有不同的温度设置,温度设置差异结果就会有差异,但是相差0.5是可以接受的
3 回答
514 围观
3 回答
514 围观
去回答
问
qPCR每次做结果都不一样,大多时候各组没有差异,怀疑QPCR不准
毛利小五郎的徒弟
先检查体系是否有降解,每次都不一致的话最可能的就是体系存在降解问题。
4 回答
949 围观
4 回答
949 围观
去回答
问
加完样本不立即上机,冻-20℃过夜可以吗?
毛利小五郎的徒弟
过夜的话样品很容易降解,建议尽快上机
4 回答
309 围观
4 回答
309 围观
去回答
问
用质粒做qPCR的时候,低浓度的不同稀释倍数质粒(1undefined4-1undefined1copies/ul)CT值结果很接近,是质粒稀释的问题吗?要
毛利小五郎的徒弟
考虑质粒本身浓度太低,所以稀释后ct值拉不开,很接近。
4 回答
834 围观
4 回答
834 围观
去回答
问
内参相差1个ct值的结果可以用吗?内参相差多少的结果可以用?如果内参差别比较大样品要如何处理呢?
毛利小五郎的徒弟
差一个ct值是可以用的,如果差的大就需要重新稀释cdna
4 回答
2445 围观
4 回答
2445 围观
去回答
问
外周血PBMC提取RNA的技巧(怎么保证提取过程中RNA不被降解)
毛利小五郎的徒弟
减少污染和高温,可以加入稳定剂。
4 回答
1543 围观
4 回答
1543 围观
去回答
问
qPCR需要保证每个样本的CDNA浓度一致吗?
毛利小五郎的徒弟
不需要完全一致,保持稀释倍数一致很重要
4 回答
3081 围观
4 回答
3081 围观
去回答
问
设置程序的时候体系是10微,实际是20微,对结果影响大吗?
z流沙z
这个问题不大,主要是程序正确就行
3 回答
182 围观
3 回答
182 围观
去回答
问
有什么能保证3个平行孔扩增曲线一致的加样技巧吗?
z流沙z
配制成预混液,然后分到每个管里面
3 回答
87 围观
3 回答
87 围观
去回答
问
直接提取并检测dna的话 引物设计有哪些注意的点?和那种mRNA逆转录成cDNA再进行检测所使用的引物以及设计过程是一样的吗?
毛利小五郎的徒弟
直接提取的话引物需要处理,比如把不翻译的修饰部分去掉。
4 回答
214 围观
4 回答
214 围观
去回答
问
内参不齐会对结果有很大的影响吗?差距多少才算齐?怎么保证内参齐呢
伯乐生命医学产品
内参不齐会对结果有影响,影响大小与差异大小有关。不同样本的内参差距建议在10倍以内,约3.3个Ct值。起始RNA含量一致,完整性相似就可以保证内参基本一致。
4 回答
6211 围观
4 回答
6211 围观
去回答
1
•••
13
14
15
16
17
•••
63
跳至
页
提问
扫一扫
实验小助手
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序