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溶解曲线出现杂峰的可能原因是什么?有哪些对应的解决办法?
dxyc42u
一般是出现引物二聚体,除此之外就要考虑及时更换试剂盒,
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问
在哪些情况下,PCR反应体系内的DNA浓度和纯度需要检测?
dxyc42u
一般做pcr都需要检测,这样才能保证要p的DNA质量,不然对结果影响大
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问
pcr快速核酸和普通核酸检测区别
huarenqiang5
常规 PCR 与快速检测的区别: 常规 PCR 检测在样本采集后需要进行核酸纯化再进行后续 PCR 反应,纯大概需要约 30 ~ 60 min。通常一块反应板中可够容纳 96 个独立的反应同时进行,(最多检测 91 个样本,外加 5 个质控样本),PCR 反应时间需要约 2 小时左右。而快速检测在样本采集后直接放入裂解液中释放核酸,通常无须进行核酸纯化可以直接进行 PCR 反应,使用快检
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问
请问退火温度如何选择?
huarenqiang5
55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。
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问
在PCR技术操作中,是否需要能量,需向溶液中加ATP吗?
丁香52
不需要,能量来自外界加热PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
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问
出现非特异性扩增带怎么办?
dxyc42u
1 提高退火温度;2 如果你的非特异袋较大,那么减少延伸时间,用15-20S试试;3 换引物,找到更特异的引物;
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问
怎样检测引物是否合成的好?
dxyc42u
一般按如下条件检测a溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为pcr产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,mirna染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75度附件b琼脂糖电泳为明亮的一条带,条带一般在100bp以上,如果设计引物时pcr产物在100bp一下,需要仔细辨认是否为引物二聚体;引物二聚体的条带一般在50bp左右,条带弥散,暗。
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问
如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验?
毛利小五郎的徒弟
没有回收到目的片段可以用已知片段做对照。
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问
qPCR方法验证误差和偏差
Dr_劉医生
非特异性误差和偏差可通过保证实验前后一致性和重复实验次数来减少。
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问
组织以及血液miRNA的提取和扩增跟mRNA的有什么区别?
Dr_劉医生
最大的区别就是二者的表达是相反的,miRNA 的高表达水平导致 mRNA 的低表达水平
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问
实验室的静电防护有简单有效的方法吗?
paj12345
不穿带绒,麻质的织物进实验室,静电是摩擦引起的;因此减少实验过程中的摩擦可以减少静电的产生,此外在秋冬季节,适当增加空气湿度,可吸收静电;金属可导电,可以在做完实验后定期接触金属制品导走身上的静电。
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问
关于PCR实验中酶的问题?
dxyc42u
单管震荡容易产生气泡不好加样。
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问
做小鼠组织剪尾提DNA进行pCR扩增测序的话,一般需要多少个循环呀。
毛利小五郎的徒弟
一般常规的PCR是反应30个循环。如果是定量实时PCR,40个循环。
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问
RT-PCR内参问题
dxyc42u
样本的浓度或者是质量有问题吗。
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问
rct,病例对照,回顾性队列的meta
Dr_劉医生
基线有分组的就是病例对照,没有的就是队列;RCT不能用nos量表,可以用Jadad量表;此外,不建议同时纳入回顾性研究和前瞻性的RCT放一起做meta,统计学的结果你解释不了。
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问
关于病例对照研究的meta,可以不评价OR值吗?
Dr_劉医生
可以用RR代替OR作为效应值,不只统计骨密度的数值,这样你meta没有任何结论。
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问
想问一下关于qpcr结果的问题
huarenqiang5
是的,如果有一个基因符合你想要的趋势,就能够把这个基因的结果单独拿出来用。
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问
一对纯合子小鼠生的后代一定是纯合子吗
huarenqiang5
是的,纯合子自交后代都是纯合子。
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问
内膜组织想做PCR,标本如何处理?
毛利小五郎的徒弟
内膜组织我一般是先消化后固定后做成悬浮细胞液然后提取RNA,然后进行pcr。
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问
冻存在-80℃的血清样本,还能提取RNA吗?
bamboopiggy
不会,只要你不反复拿出来冻融,放半年再提rna都没问题
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