同一个样本做同一个基因，做了两个复孔，但是一个孔溶解曲线的温度是81.5，另外一个孔是81度，这是为什么呢？（溶解曲线都是单峰）

设置的问题，溶解会有不同的温度设置，温度设置差异结果就会有差异，但是相差0.5是可以接受的

可能的原因包括：

不同位置的反应条件略有不同。即使在同一实验板中，不同的复孔之间也可能存在微小的反应条件差异，例如微小的温度差异或反应液体积的微小差异，这可能会影响PCR产物的熔解行为。

技术上的误差。在PCR过程中，一些技术上的误差可能会导致产物的熔解行为稍有不同，例如反应液体积、反应时间或温度梯度等的微小变化，这些变化可能会导致溶解曲线温度略微不同。

在你的实验中，由于两个复孔的溶解曲线都是单峰，因此可以认为两个复孔的PCR产物是类似的，可以将它们视为同一基因的表达值。不过，为了更加准确地比较基因的表达量，可以在每个复孔中进行多次PCR反应，并计算每个复孔中的平均溶解曲线温度，以减少技术误差对结果的影响。

由于溶解曲线分析一般设置0.5度温度间隔采集荧光信号，因此溶解峰相差0.5度应该是同样的扩增产物，没问题。