实时荧光定量 PCR（realtime PCR）

一、 样品RNA的抽提 1. 取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。 2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZ

实时荧光定量 PCR（Real-Time PCR）实验流程一、RNA 的提取不同组织样本的 RNA 提取适用不同的提取方法，在总 RNA 的提取过程中，注意避免 mRNA 的断裂；取 2 μg 进行 RNA 的甲醛变性胶电泳检测，如果存在 DNA 污染时，要用 DNase I 进行消化（因为在处理过程中 RNA 极易降解，建议体系中加入适量 RNA 酶抑制剂）。二、DNase I 消化样品 RNA

DEPC 处理方法如下1. DEPC处理（1）DEPC水：100 ml超纯水加入0.2 ml DEPC，充分混匀，高压灭菌。（2） Tip头(枪头）. EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材（包括1 ml. 200 μl. 20 μl Tip头；EP管和PCR反应管等）：用0.1%的DEPC水（1000 ml超纯水加入1ml DEPC）37 ℃浸泡过夜，高压灭菌。2. 提取RNA，用