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实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

实时荧光定量PCR可应用于: (1)定量分析未知模板;(2)单个或多个基因表达谱分析。

来源:丁香实验

操作方法

实时荧光定量PCR技术

一、 样品RNA的抽提 1. 取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。 2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZ

🔥 Real-time PCR(基本方法一)

实时荧光定量 PCR(Real-Time PCR)实验流程一、RNA 的提取不同组织样本的 RNA 提取适用不同的提取方法,在总 RNA 的提取过程中,注意避免 mRNA 的断裂;取 2 μg 进行 RNA 的甲醛变性胶电泳检测,如果存在 DNA 污染时,要用 DNase I 进行消化(因为在处理过程中 RNA 极易降解,建议体系中加入适量 RNA 酶抑制剂)。二、DNase I 消化样品 RNA

Real-time PCR(基本方法二)

DEPC 处理方法如下1. DEPC处理(1)DEPC水:100 ml超纯水加入0.2 ml DEPC,充分混匀,高压灭菌。(2) Tip头(枪头). EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材(包括1 ml. 200 μl. 20 μl Tip头;EP管和PCR反应管等):用0.1%的DEPC水(1000 ml超纯水加入1ml DEPC)37 ℃浸泡过夜,高压灭菌。2. 提取RNA,用

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