实时荧光定量 PCR 实验重复不出来是怎么个情况？

唐春艳

2013-08-03

之前在机器上做的图可以看到很明显也很高的溶解曲线，但是优化条件的时候就越来越没有了，而且同样的东西做了两次结果都不太一样，是差别很大的那种。
有没有见过我这种问题，是基因不好做？还是机器有问题？自己觉得即使操作再不过关，也不至于把有的做成没的了吧？求高人指点，谢谢！

健坤免疫组化

2015-09-07

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同样的样本，做两次曲线肯定不是完全一样的，你需要计算两条曲线的Ct值来判断的！Ct值是结果分析的标准！这是因为，同一模板在同一台仪器上的扩增曲线不同pcr终点产物差异也很大，但是Ct只与初始模板量是有关系的。

hml04010418

2013-09-04

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没有具体信息。每次条件的一致包括样本处理的一致。

苏格兰白草莓

2013-08-06

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你怎么优化了一下条件，能不能详细点说明，还有就是同样的东西做了两次结果都不太一样，差别很大是指的在完全一样的操作条件下，还是东西一样的，但是条件改变了？如果都是一摸一样的条件和样品，结果不一样的话，可以考虑扩大反应体系来减少误差，枪要精准，操作要熟练，这个需要多做

王建勇

2013-08-06

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优化条件的时候就越来越没有了是什么意思？条件改变了结果改变是很有可能的。同意wk125的观点，最好跑个胶看下条带的特异性，因为你是用染料法做的，扩增的特异性很重要。

wk125

2013-08-05

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我感兴趣的是你溶解曲线的峰宽怎么样？峰的位置在哪里，在实验结果不明确的时候，可以跑个电泳看下扩增后条带怎么样，有没有非特异扩增，等等。