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补实验的时候,以及想把同一材料的多个基因的表达放一张图,以看出来趋势的时候,如何进行板间校正?

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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实验室小助理夏奇

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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

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可以用image做板间校正,把所有结果放在一张图上

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loveliufudan

有帮助

如果您要进行板间校正(plate normalization),可以尝试使用以下方法:

基于内参基因的标准曲线法:首先使用一个或多个内参基因(如GAPDH,β-actin等)构建标准曲线,并将不同板的样品分别进行PCR扩增和荧光检测,然后使用内参基因的Ct值进行标准曲线法计算,将不同板的数据转换成标准化数据。

基于总RNA量的相对定量法:在RNA提取过程中,可以在不同板的样品中加入相同量的外源RNA(如同一种体积的外源RNA),并在每个板中使用相同量的总RNA进行cDNA合成和PCR扩增。然后,将不同板的目标基因的Ct值除以相应板的外源RNA的Ct值,计算相对表达量。

基于内部标准品的标准曲线法:在不同板的PCR反应中,加入已知浓度的内部标准品,然后使用内部标准品的Ct值构建标准曲线,将不同板的样品数据转换成标准化数据。

对于同一材料的多个基因的表达放一张图的情况,可以使用以下方法:

在同一张图上同时显示多个基因的表达水平,以便直观比较它们之间的趋势。

使用不同的颜色或样式来区分不同的基因,以便更容易识别。

在图例中清楚地标注每个颜色或样式对应的基因名称和缩写。

在图像上使用板间校正后的数据,以消除板间误差的影响,从而更准确地反映不同基因之间的表达趋势。

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伯乐生命医学产品

有帮助

可使用CFX定量软件中的gene study功能进行多板分析,并通过每块反应板上的板间校正孔校正(板间校正孔指在不同次运行的PCR板放置同一扩增反应体系的孔)。

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