定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影

定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影可能会影响结果的准确性，建议排除掉拖影问题后再进行数据分析。拖影一般是由于PCR反应过程中，引物结合到非特异性模板上扩增所导致的。这种非特异性扩增可能是由于PCR反应条件不恰当或引物设计不合理所导致的。

以下是一些可能导致PCR反应中出现拖影的原因和解决方法：

PCR反应条件不恰当：PCR反应温度过低或时间过长，会导致扩增产物不特异性地结合到非特定的模板上，从而导致拖影。建议检查PCR反应体系的温度和时间，尝试调整PCR反应条件。

引物设计不合理：引物的设计可能存在一些问题，如引物过于简短、非特异性、重叠等，会导致引物结合到非特定的模板上扩增。建议重新设计引物，保证其特异性和可靠性。

PCR反应过程中污染：PCR反应体系中可能存在细菌、真菌、DNA片段或其他污染物，这些污染物可能与引物或PCR产物结合并扩增。建议加强实验室清洁措施，避免污染，并使用高质量的PCR试剂。

模板DNA浓度过高：如果模板DNA浓度过高，PCR反应中可能出现非特异性扩增，导致拖影。建议优化模板DNA浓度，避免过高或过低。

不建议使用了，一般拖尾代表已有降解

脱尾可能是体系中存在降解导致的，去除降解因素。