qPCR每次做结果都不一样，大多时候各组没有差异，怀疑QPCR不准

先检查体系是否有降解，每次都不一致的话最可能的就是体系存在降解问题。

以下是一些可能导致aPCR结果不一致的常见因素：

实验操作技术误差：例如反应体积的微小变化、反应管的不同、样品质量差异等因素可能导致PCR反应结果的不稳定性。

实验条件差异：例如不同实验室的温度、湿度、pH值等因素可能导致PCR反应结果的不稳定性。

实验试剂差异：例如不同批次的PCR试剂可能存在差异，如引物浓度、酶活性等方面的差异，这些因素可能导致PCR反应结果的不稳定性。

数据分析方法差异：不同的数据分析方法可能会影响结果的稳定性，如不同的基准线选择、阈值设置等因素可能导致结果的不稳定性。

首先排除操作是否有问题，可以添加阳性和阴性对照，其次确认细胞状态，状态不佳会影响实验结果

qPCR本身即是实时荧光定量相对定量，Ct值受荧光阈值和扩增曲线、扩增效率等因素影响以及技术误差，所以在预实验中要确认引物/探针特异性，扩增效率，扩增条件是否需优化，以期得到准确可靠的Ct值，在可靠的Ct值基础上进行基因表达分析。