丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

如果RNA提取浓度太低(甚至达不到逆转要求的量)的情况下,定量是不是只能靠cDNA浓度?

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

user-title

实验室小助理夏奇

wx-share
分享

4 个回答

user-title

毛利小五郎的徒弟

有帮助

如果rna浓度太低,可以靠cdna进行定量,但如果二者浓度差异太大,结果误差也会增高。

user-title

loveliufudan

有帮助

在RNA提取浓度太低的情况下,如果不能使用光谱法(如NanoDrop)或荧光法(如Qubit)准确地测量RNA浓度,可以考虑使用cDNA浓度来定量RNA。

通常情况下,RNA和cDNA之间具有线性关系,即在逆转录反应中,使用相同量的RNA可以合成相同量的cDNA。因此,可以通过比较相同反应条件下,不同样品的cDNA浓度来大致比较它们的RNA含量。

需要注意的是,在使用cDNA浓度来定量RNA时,要保证逆转录反应的条件相同,例如使用相同体积的RNA模板、相同反应时间和温度等。此外,由于RNA的损失或降解可能导致RNA/cDNA转化效率的降低,因此,在使用cDNA浓度来定量RNA时,需要谨慎处理样品,以避免RNA的损失或降解。

user-title

z流沙z

有帮助

如果样品比较宝贵,就按最大量进行进行逆转录和qpcr,如果还有样品,建议重新提取,最后可以减少溶解体积来增大浓度

user-title

伯乐生命医学产品

有帮助

理论上RNA的量和cDNA的量是一一对应的,所以如果RNA的量太低,cDNA的量也不会高。另外,如果RNA的量低于反转录要求,那么会影响反转录效率,在这种情况下,无论目的基因的表达丰度是高还是低,定量结果都可能不准确。因此RNA的量要达到反转录要求是定量准确的前提。另外,您可以选择反转录动态范围较宽的试剂盒,相关产品可以咨询伯乐当地代理商或技术支持。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序