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qPCR 常见问题

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问qPCR溶解曲线

晓雨知春来

有可能是高盐浓度导致熔解曲线出现低谷。

3 回答1483 围观

问动物组织qpcr跑不出来

dxy_c430nxh5

可以排除仪器，操作，试剂的问题那就是实验设计的问题了，你前后换了组织，该组织里面可能不含有你想要的目的基因，内参基因能出来是正常的，因为它存在所有的组织里面，但是你得目的基因不一定存在你后面的组织里面

4 回答735 围观

问qpcr用水代替模板上机，结果仍然有曲线，是引物的问题还是被污染了？

bamboopiggy

可能是引物二聚体，也可能是水被污染了，这个要更换其中一个进行判断

3 回答649 围观

问荧光定量PCR求教

dxyc42u

SD一般控制在0.2一下，ct值每个板子算每个板子，不能板间比较

3 回答477 围观

问qPCR 检测巨噬细胞分型

dxyc42u

建议排查下qpcr复孔差异大的时候容易出现这种结果

3 回答1323 围观

问请教QPCR 上样顺序？

balalaLy

中途不需要离心的，全部加完贴膜之后再离心就行了。

5 回答1408 围观

问qPCR内参Ct值

橙汁儿青柠味

模板cDNA稀释的比较多所以内参的ct值比较大，然后目的基因的表达丰度比较高，所以ct值比内参小

3 回答1134 围观

问加完样本不立即上机，冻-20℃过夜可以吗？

土井挞克树

过夜的话样品很容易降解，建议尽快上机

4 回答612 围观

问用质粒做qPCR的时候，低浓度的不同稀释倍数质粒（1undefined4-1undefined1copies/ul）CT值结果很接近，是质粒稀释的问题吗？要

土井挞克树

考虑质粒本身浓度太低，所以稀释后ct值拉不开，很接近。

4 回答1190 围观

问如果RNA提取浓度太低（甚至达不到逆转要求的量）的情况下，定量是不是只能靠cDNA浓度？

土井挞克树

如果rna浓度太低，可以靠cdna进行定量，但如果二者浓度差异太大，结果误差也会增高。

4 回答1352 围观

问弱弱的问一句，所以文献中经常看到的qRT-PCR就是Real-time RT-PCR（RT-qPCR）吗？

whilt-shirt

是的，qRT-PCR就是Real-time RT-PCR

4 回答6596 围观

问SYBR Green 的qPCR产物长度对结果的影响，求助🆘

简简单单的8872

是的，内参600和目的250确实有差异，荧光阈值也会有差异，但是既然有内参，你最后测定的是相对值（目的/内参），应该是同一批实验条件一致即可。另外内参为何不选的小一些，对qPCR来说600有些大了些

4 回答661 围观

问qPCR加完样之后可以先放在4℃冰箱吗

凌晨三点Dxy

4小时内放4℃冰箱，超过4小时放-20℃冰箱

5 回答12842 围观

问qpcr 内参ct值在15-25左右，但是目的ct值在31左右。怎么解决ct值过高问题，数据是否能用？

bamboopiggy

内参在15-25，目的在31是可以的，但是数据能不能用要看melt curve

3 回答5550 围观

问qpcr跑出来的结果很奇怪，求解

huarenqiang5

目的基因表达量偏低目的基因引物扩增效率低

2 回答604 围观

问请问大家，qPCR 的CT值在30多是正常的吗？

bamboopiggy

ct值在30多，目的基因可以，但是内参不行

6 回答4788 围观

问qPCR平台期时，曲线呈现锯齿状，模板是质粒

bamboopiggy

可能是机器需要校正了，叫工程师来校一下

4 回答638 围观

问跑qPCR，内参基因和目的基因CT值正常，结果也比较理想，但内参基因熔解曲线呈较宽的单峰，Tm比目的基因熔解曲线低很多，有效吗？

bamboopiggy

看图，感觉两个melt curve 底边是一样宽的，但是你如果觉得内参基因的宽，可以考虑换一个大家常用的内参基因试试，一般情况，内参基因不会出现这种问题。

3 回答696 围观

问Qpcr实验中遇到的问题

bamboopiggy

把variation太大的孔删除掉，不能用。加样尽量用好一点的枪和枪尖，同一个样品，可以用同一个枪尖加。

4 回答412 围观

问qpcr无模板阴性对照出现 CT 值时，目的基因的 CT 值是否还能用？

dxywode

有可能的，因为CT值越小，基因表达就越高，所以还是有可能的。你要是觉得不放心可以做一个重复实验。

3 回答3970 围观

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