SYBR Green 的qPCR产物长度对结果的影响，求助🆘
羽毛毛毛毛毛毛毛
用的是SYBR Green的方法做的qPCR，内参基因产物条带大小是600，目的基因是250左右，不知道这两个不一样会不会对结果有影响。
也看了一些讨论有的说有影响有的说没有只跟基因拷贝有关，自己理解的如果SYBR Green染料在每一个DNA双链螺旋的小沟结合，那600的长度每条扩增的肯定比250的荧光染料结合的多吧？感觉好像会减少达到阈值的循环数。
（自己的理解的，但是在想是不是指数扩增数量猛地增高，所以可以无视600比250多的一点点的荧光染料？就像过大可以趋近于♾️那样理解？）
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4 个回答
行而上学不行
有帮助
太大严重影响扩增效率,一般为70-200bp.
羽毛毛毛毛毛毛毛
扩增效率会影响结果ct值么。
juyue2010
有帮助
会有影响，qPCR中，基因片段最高不超过250bp，否则会影响扩增效率，
简简单单的8872
有帮助
是的，内参600和目的250确实有差异，荧光阈值也会有差异，但是既然有内参，你最后测定的是相对值（目的/内参），应该是同一批实验条件一致即可。另外内参为何不选的小一些，对qPCR来说600有些大了些
羽毛毛毛毛毛毛毛
引物不是自己设计的，是从别的文章down下来的，后来才发现这么大。不过这样看来对实验结果应该不会有影响咯？
毛利小五郎的徒弟
有帮助
指数扩增的时候的确会接近于无穷大，所以荧光可忽略。
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