请教QPCR 上样顺序？

中途不需要离心的，全部加完贴膜之后再离心就行了。

可以把cdna的添加顺序挪到后面，就可以尽量减少蒸发

应该先加预混的探针，因为你加的探针量更大，冰上加样。

QPCR的样品加样顺序是没有固定的标准的，你的方法也可以。如果你担心CDNA的体积变小，可以考虑以下几个方法：

1.使用小容量管子，这样就减少了空间，减少了CDNA蒸发的可能性

2.快速加样，减少CDNA暴露在空气中的时间

3.让实验室保持较低的温度和湿度，减少CDNA的蒸发。

如果这些措施仍然不能保证CDNA的稳定，建议使用新鲜的CDNA样本或者进一步稀释CDNA样本来减少蒸发的影响。

先将酶水引物等配成mix，分装到每个孔，最后加样品