动物组织qpcr跑不出来

细胞qpcr做过无数次，换成做动物组织qpcr，一开始用tri'zol法提取的rna纯度偏低，一般1.7~1.8左右，但是此时pcr能正常跑出来，然后换成了柱法提取rna，纯度基本1.9左右，然后跑出了第一批qpcr，等我用柱法提取第二批别的部位的组织pcr时，纯度和浓度都很好，但是qpcr只能跑出来内参和另外一个基因。我一开始觉得是我的无酶水污染了，换了一下无酶水还是只能跑出内参和一个基因，然后我重新合成了跑不出来的引物的序列，（这些序列我细胞实验和前期动物都跑出来过），然后还是跑不出来，最我把我之前能跑出来的标本和最近跑不出来的标本都拿来跑了一下 发现全部都跑不出来了。。。如果是试剂问题，我最近才做了一次细胞的qpcr，完全正常，证明我的逆转录试剂盒pcr试剂没问题，机器参数我一直都是这些参数.。。。我真的要崩溃了。。。完全搞不清楚是哪里出了问题。希望有大神指点一下，我已经卡在这里一个多月了。要疯了！