细胞实验

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

来源：《人干细胞培养》

缩小细胞培养体积试验证明，MSCs最好培养于直径15cm的Nunclon或Corning板中，面积在140cm2和150cm2之间。细胞产率取决于培养皿的数量，一般使用此方法传代，每个培养皿中可收获5X105个细胞。来源：《人干细胞培养》

大鼠MSCs的培养基本上与人MSCs的培养方法相同，只有少许差异。人和大鼠MSCs扩增方案的主要区别是，大鼠MSCs最好在单层细胞40%〜50%汇合时传代，而人的细胞可以在密度达到50%〜60%汇合后传代。这是因为，培养中过度的细胞间接触会使大鼠MSCs的增殖和多向分化潜能显著下降。收集大鼠MSCs时，骨髓细胞应取自新处死动物的长骨。用生长培养基冲洗骨可得到骨髓。来源：《人干细胞培养》

基因纯化，可以用于（1）对大量提取的质粒DNA进行纯化；（2）常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。

Southern印迹主要用于：基因组DNA的检测分析。

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

来源：《人干细胞培养》

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

用不同浓度的实验试剂将细胞处理24h 。经胰蛋白酶消化后，以低细胞密度接种，温育1～3 周，染色后 计集落数。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

组织切碎后于胰蛋白酶中搅拌数小时，每隔半小时收集已分离的细胞，离心后加入含血清的培养基。

活细胞可以摄取二乙酰荧光素，并将它水解成荧光素，荧光素不能透过活细胞的细胞膜[Rotman and Papermaster，1966]。活细胞发出绿色荧光，而死细胞则不能。没有生存力的细胞也可能被碘化丙啶染色，随后发出红色荧光。细胞生存力可以用 发绿色荧光的细胞的百分数来表示。该方法可用于CCD分析或流式细胞仪（见21.7.2节)。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

将组织切碎并浸洗，组织块接种于培养瓶或皮氏培养皿的表面，加入少量含高浓度血清（40 %~50 % ) 的培养基，表面张力使标本保持原位，直到它们自发地贴附于表面，随后细胞开始生长。

生存力分析用于检测潜在的损伤过程，如原代分离、细胞分离或冻融后活细胞的比例。多数生存力试验都是基于膜的完整性发生了破坏，这可通过染料的摄取来测定，这 种染料在正常情况下不能进入细胞（如台盼蓝、藻红或萘黑），或是正常时由活细胞摄 取并储留其间，此时被释放出来（如二乙酰荧光素或中性红）。然而，这种效应是瞬时的，并不是总能预示最终的存活。另外，染料排斥总是过高地估计了细胞的生存力，例 如保存在液氮中的细

与医院人员协商，提供已标记的装有培养基的容器，安排好从手术室或病理医生处取样品。

取出前列腺和处理标本（30 min），用胶原蛋白酶消化前列腺组织（1 h），收集单个细胞和小的细胞团（1 h）。接种细胞，培养至形成单层（7 d）。