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简介
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。
来源:丁香实验
操作方法
1. 收获标记细胞。 2. 小心处置上清液,用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀,每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。 3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。 4. 加等体积的水饱和酚,充分混匀,于 60℃ 加热 5 分钟。 5. 再次用旋涡器振荡混匀,冰浴 15 分钟。 6. 于 4℃ 以 5000 g 离心 10 分钟,此时溶液很清楚地分成 4
用丙烯酰胺-尿素凝胶纯化RNA1. 准备下列溶液: TBE 缓冲液:Tris 碱 54 g,硼酸 27.5 g,0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 20 ml,溶解并加水至 1000 ml。当发现贮存液有白色沉淀时应予抛弃。 丙烯酰铵溶液:丙烯酰胺 77.3 g,N,N'-亚甲双丙烯酰胺 27 g,尿素 420 g,5xTSE 200 ml,加水至 1000 ml 充分搅拌溶解固体成分,用 Whatman 3